Análise de osteoblastos in vitro por microscopia

Abstract

As amostras processadas para microscopia eletrónica são geralmente tecidos ou fragmentos sólidos. O processamento de células ou partículas isoladas permanece ainda um desafio pelas particularidades únicas que uma população de células/partículas apresenta em suspensão. A microscopia eletrónica fornece detalhes da estrutura, organização e interação das células, dentro dos tecidos. Esta informação microscópica das células pode ter múltiplas aplicações nas ciências da vida. O principal objetivo deste trabalho consistia em estabelecer um protocolo que permitisse analisar células cultivadas in vitro (osteoblastos), ao microscópio eletrónico de transmissão (TEM). Neste trabalho, a técnica otimizada baseou-se na incorporação das células num gel – agar, o que permitiu que fossem manipulados de forma semelhante a pedaços de tecidos durante os passos seguintes do processamento. A sua utilização apresentou resultados positivos e promissores. Este protocolo apresenta a vantagem de poder ser utilizado para o estudo de outras partículas em suspensão, não só células, mas também em estruturas subcelulares e organismos, como leveduras, vírus e bactérias.

The samples processed for electron microscopy are often, solid tissue or fragments. The processing of isolated cells or particulate remains as challenge. The electron microscopy provides details of the unique cell structure, organization and interaction within the tissues. The microscopic visualization of cells in suspension may have multiple applications in life sciences. The main objective of this study was to establish / achieve a protocol for analyzing / studying in vitro cultured cells (osteoblasts), for transmission electron microscope (TEM). In this work, the technique optimized was based on the incorporation of the cells in gel - agar. This allows that can be handled similar to fragments during the following processing steps. Its use had positive results and promising. This protocol has the advantage that it can be used for the study of other particulate matter, not only cells but also in subcellular structures and organisms lives yeasts, viruses and bacteria.