Please use this identifier to cite or link to this item:
http://hdl.handle.net/10773/4061
Title: | Identification of therapeutic biomarkers in melanoma |
Other Titles: | Identificação de biomarcadores terapêuticos em melanoma |
Author: | Tavares, Sandra Raquel de Oliveira |
Advisor: | Soares, Paula |
Keywords: | Biomedicina Melanoma Terapêutica |
Defense Date: | 2011 |
Publisher: | Universidade de Aveiro |
Abstract: | O melanoma deriva da transformação maligna de melanócitos e é
frequentemente encontrado na pele e na região ocular. A identificação de
marcadores moleculares que inequivocamente indiquem a agressividade do
tumor ou que possam prever a resposta/resistência a uma terapia é uma
prioridade da comunidade científica que estuda esta patologia. Mutações do
gene do BRAF, maioritariamente V600E e mutações do gene do NRAS têm
sido implicadas no desenvolvimento de melanoma cutâneo. Enquanto,
mutações nos genes do GNAQ e GNA11 são encontradas com elevada
frequência em melanomas uveais. Todas estas mutações podem levar à
activação da via de sinalização das MAP cínases, conduzindo ao aumento da
proliferação celular
O objectivo deste estudo foi a identificação de mutações genéticas frequentes
como indicadores de prognósticos ou de previsão de resposta a uma terapia
de inibição da via do mTOR e avaliar o potencial de efectores desta via como
biomarcadores terapêuticos em melanomas cutâneos e oculares.
A existência de alterações genéticas nos genes do BRAF e NRAS foi
determinada em 13 casos de melanoma cutâneo. O estado mutacional dos
genes GNAQ e GNA11 foi avaliado em 34 casos de melanoma ocular. A
análise mutacional foi realizada com recurso a PCR e sequenciação. A
associação entre o estado mutacional e as características clínico-patológicas
foi também estudada. Um conjunto de linhas celulares de melanoma com
diferentes perfis genéticos foi tratado com um fármaco inibidor do mTOR,
RAD001. A proliferação celular e apoptose foram avaliadas com os ensaios
SRB e TUNEL, respectivamente, a expressão de efectores da via do mTOR foi
detectada por immunoblotting.
G361, uma linha celular derivada de melanoma cutâneo com mutação
BRAFV600E, apresentou a maior inibição de crescimento após tratamento
com RAD001. RAD001 não induziu um aumento de apoptose em nenhuma
das linhas celulares utilizadas neste estudo, sugerindo que o RAD001 não
induz alterações no processo de apoptose.
Este estudo apresenta a mutação BRAFV600E como um possível marcador
terapêutico do fármaco, RAD001, para pacientes com melanoma cutâneo mas
não para pacientes com melanoma ocular, podendo no futuro ser uma
ferramenta útil na selecção de pacientes para uma terapia baseada na inibição
do mTOR. Melanoma results from the malignant transformation of melanocytes and is frequently found in the skin and ocular region. The identification of molecular biomarkers, which unequivocally indicate the aggressiveness of the tumour or predict the response/resistance to a therapy, is of high priority in the field of melanoma research. BRAF gene mutations, predominantly V600E, and mutations in the NRAS gene have been implicated in the development of cutaneous melanoma. Mutations in the GNAQ and GNA11 genes are found frequently in ocular melanoma, particularly in the uveal subtype. These mutations can lead to the activation of the MAPK pathway, which can lead to growth-promoting activities. The aim of this study was to identify frequent mutations that can be used as prognosis or predictive markers for mTOR pathway inhibition. In addition, the potential of mTOR pathway effectors as therapeutic biomarkers in cutaneous and ocular melanoma was also addressed. Genetic alterations in the BRAF and NRAS genes were determined in 13 cutaneous melanoma tumour samples and GNAQ and GNA11 genes mutational status were evaluated in a series of 34 tumour samples of ocular melanoma. Mutational analysis was done by PCR/Sequencing. The mutational status and its correlation to clinical-pathologial features was then assessed. A panel of melanoma cell lines with different BRAF, GNAQ and GNA11 mutational status were treated with RAD001, an mTOR pathway inhibitor. Cell viability and apoptosis were assessed by SRB assay and TUNEL assay, respectively, mTOR pathway effectors expression levels were detected by immunoblotting. G361, a cutaneous melanoma-derived cell line, which harbours BRAFV600E, showed the highest level of cell growth inhibition after treatment with RAD001. RAD001 did not induce increased levels of apoptosis in any of the cell lines treated, suggesting that RAD001 does not induce alterations in the apoptosis process. This study supports BRAF mutational status as a possible predictive biomarker to RAD001 treatment in cutaneous melanoma but not in ocular melanoma patients and as a promising tool to select patients to mTOR inhibition therapy. |
Description: | Mestrado em Biomedicina Molecular |
URI: | http://hdl.handle.net/10773/4061 |
Appears in Collections: | DCM - Dissertações de mestrado UA - Dissertações de mestrado |
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.