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http://hdl.handle.net/10773/8374
Title: | Nova abordagem no estudo da distrofia muscular das cinturas tipo 2A |
Author: | Maia, Nuno Miguel da Silva |
Advisor: | Oliveira, Márcia Almeida, Adelaide |
Keywords: | Biologia molecular Distrofia muscular Diagnóstico |
Defense Date: | 15-Dec-2011 |
Publisher: | Universidade de Aveiro |
Abstract: | As distrofias musculares são um grupo heterogéneo de doenças genéticas
caracterizadas por fraqueza muscular progressiva. Até agora, foram mapeados
18 genes associados a um subgrupo específico de distrofias musculares
denominado distrofias musculares das cinturas (limb-girdle muscular
dystrophies, LGMD). As mutações no gene CAPN3 são responsáveis pelo
fenótipo de calpainopatia ou distrofia muscular das cinturas tipo 2A (LGMD2A),
uma das formas mais frequentes de LGMD. O gene CAPN3 codifica a proteína
calpaína 3 (ou CAPN3), uma protease de cisteína dependente de cálcio,
específica do músculo esquelético, regulada funcionalmente através da sua
actividade autolítica. O mecanismo de patogénese da LGMD2A ainda não se
encontra esclarecido, mas pensa-se que em grande parte esteja associado a
défices funcionais da CAPN3.
Com o presente trabalho, propõe-se uma nova abordagem de estudo no
diagnóstico da LGMD2A combinando técnicas moleculares e análise de
proteínas, no sentido de contribuir para um diagnóstico diferencial essencial na
caracterização global de doentes com calpainopatia, especificamente nos
casos de doentes com sintomas de distrofia muscular não específicos.
Amostras de biópsia muscular de 9 doentes com LGMD2A, previamente
estudados molecularmente, foram submetidos à análise de proteínas e testes
funcionais através de western blotting e densitometria. Adicionalmente, foram
efectuados estudos de expressão génica utilizando PCR em tempo real
quantitativo.
Uma análise global dos resultados obtidos permitiu: (a) completar o
diagnóstico molecular efectuado nos doentes 2-7, incluindo a identificação de
um defeito funcional da CAPN3 no caso do doente 3; (b) confirmar o
diagnóstico clínico no doente 8 (com apenas uma mutação em heterozigotia),
também causado pelo défice funcional da proteína; e (c) excluir o envolvimento
da CAPN3 nos restantes 2 doentes com apenas um alelo mutado em
heterozigotia, devido à elevada expressão observada para o gene CAPN3
comparativamente com as amostras controlo. Muscular dystrophies comprise a group of heterogeneous genetic diseases characterized by progressive muscle weakness. Until now, eighteen genes have been associated to a specific subgroup of muscular dystrophies called limb-girdle muscular dystrophies (LGMD). Mutations in the CAPN3 gene are responsible for calpainopathy or limb-girdle muscular dystrophy type 2A (LGMD2A), one of the most frequent form of LGMD. The gene CAPN3 codes for calpain 3 (or CAPN3), a muscle-specific calcium-dependent cysteine protease functionally regulated via its autolytic activity. The pathogenesis mechanism of LGMD2A still continues to be unresolved, however functional defects of CAPN3 seem to be the major cause of the pathology. With the present work, it is proposed a new approach for the LGMD2A diagnostic analysis, combining molecular genetics and protein analysis methodologies in order to contribute to a differential diagnostic essential for global characterization of patients, specifically among patients with non-specific muscular dystrophy symptoms. Muscle biopsy samples of 9 LGMD2A patients, already studied at the molecular genetics level, were subjected to protein analysis and functional tests by western blotting and densitometry analyses. Additionally, gene expression studies were performed using real-time quantitative PCR. A global analysis of the data obtained allowed us: (a) to complement the previous molecular genetics study in patients 2-7, including the identification of a CAPN3 functional defect in patient 3; (b) to confirm the clinical diagnostic in patient 8 (with only one mutation in heterozygous state) also caused by a protein functional defect; and (c) to exclude the CAPN3 implication in the other two patients which presented one mutated allele in heterozygous state, because of the detection of an overexpression of the CAPN3 gene in comparison to control samples. |
Description: | Mestrado em Biologia Molecular e Celular |
URI: | http://hdl.handle.net/10773/8374 |
Appears in Collections: | UA - Dissertações de mestrado DBio - Dissertações de mestrado |
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