Resistência a antimicrobianos em unidades de saúde: caracterização de isolados bacterianos clínicos e ambientais

Abstract

A resistência a antimicrobianos tem vindo a mostrar-se como uma ameaça em vários setores devido à utilização descomedida destes compostos. O presente estudo teve como objetivo a caracterização de perfis de resistência a antimicrobianos e correspondentes genéticos. Foi feita a pesquisa de genes que codificam para β-lactamases de espetro alargado (ESBL), testando CTX-M-G1, CTX-M-G2, CTX-M-G8, CTX-M-G9 e CTX-M-G25 como seus representantes, e carbapenemases, especificamente IMP, VIM, KPC, NDM e OXA-48, de isolados bacterianos provenientes de unidades de cuidados de saúde agudos e de longa duração. A sua identificação foi realizado por espetrometria de massa de ionização/desorção de matriz assistida por laser/tempo de “voo” (MALDI-TOF MS). Obtidos a partir de meios seletivos, foram analisados isolados clínicos (n=221), ambientais de superfície (n=110) e ambientais do ar (n=211), dos quais 65, 54 e 92 isolados, respetivamente, foram identificados. . Todos os isolados obtidos foram caracterizados quanto aos seus perfis de suscetibilidade a antimicrobianos, pelo método de difusão em agar com discos de antimicrobianos da classe dos β-lactâmicos (AUG, FOX, CTX, CAZ, MEM, IMI, ATM), aminoglicosídeo (AK) e fluoroquinolona (CIP). A pesquisa de ESBL foi realizada em 55 isolados clínicos, 30 isolados ambientais de superfície e 12 isolados ambientais do ar, enquanto a pesquisa de carbapenemases foi realizada em 15 isolados clínicos, 15 isolados ambientais de superfícies e 6 isolados ambientais do ar. Os resultados obtidos, quanto à identificação dos isolados, evidenciaram a predominância de membros da família Enterobacteriaceae nos isolados clínicos (48 de 65) e de superfícies (40 de 54) e de membros da família Staphylococcaceae (44 de 67) em isolados do ar, com maior frequência das espécies Escherichia coli (18 de 48) nos isolados clínicos, Serratia liquefaciens (15 de 40) nos isolados de superfícies e Staphylococcus hominis (11 de 44) nos isolados do ar. Relativamente aos perfis de susceptibilidade a antimicrobianos observados, destaca-se nos isolados clínicos a maior resistência a AUG (184 de 221) e AML (131 de 221) e menor resistência a MEM (5 de 221). Nos isolados de superfície, destacou-se uma maior resistência ao AUG (85 de 110) e AML (55 de 110) e menor resistência a IMI (1 de 110), MEM (1 de 110), CIP (3 de 110) e AK (6 de 110). Nos isolados do ar destacou-se maior resistência ao AUG (18 de 67) e CIP (18 de 67) em Gram-positivos e a ATM (9 de 25) em Gram-negativos. Da interpretação destes perfis, foi possível apurar um total de 82 isolados clínicos (37%), 47 isolados ambientais de superfícies (42,7%) e 14 isolados ambientais do ar (6,3%) considerados multirresistentes (MDR). A pesquisa de ESBL e carbapenemases em isolados clínicos revelou a dominância de blaCTX-M-G1 (38 de 55) e de blaKPC (8 de 15). Ao contrário do observado nos isolados clínicos, os isolados ambientais de superfícies revelaram a predominância de blaCTX-M-G8, (16 de 30) blaCTX-M-G9 (15 de 30), blaNDM (9 de 15) e blaVIM (7 de 15). Em isolados do ar, esta pesquisa apenas num resultado positivo para a presença de blaOXA-48. Os resultados obtidos neste trabalho evidenciam a presença de patogéneos MDR contendo importantes determinantes genéticos de resistência antimicrobiana não só em doentes, mas também em diferentes contextos ambientais de unidades de saúde, destacando não só o papel do doente, mas também dos profissionais de saúde, na propagação de agentes patogénicos, elucidando a conjuntura em unidades de cuidados de saúde portuguesas, em concordância com o já reportado na Europa.

Antimicrobial resistance has emerged as a threat in several sectors due to the excessive use of these compounds. The present study aimed to characterize antimicrobial resistance profiles and corresponding genetics. A search for genes encoding extended-spectrum β- lactamases (ESBL) was carried out, testing CTX-M-G1, CTX-M-G2, CTX-M-G8, CTX-M-G9 and CTX-M-G25 as its representatives, and carbapenemases, specifically IMP, VIM, KPC, NDM and OXA-48 from bacterial isolates from acute and long-term healthcare units. Its identification was carried out by matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS). Obtained from selective media, clinical (n=221), surface (n=110) and airborne (n=211) isolates were analyzed, of which 65, 54 and 92 isolates, respectively, were identified.All isolates obtained were characterized regarding their susceptibility profile, using the agar diffusion method with antimicrobial discs from the β-lactam class (AUG, FOX, CTX, CAZ, MEM, IMI, ATM), aminoglycoside (AK) and fluoroquinolone (CIP). ESBL search was performed on 55 clinical isolates, 30 surface isolates and 12 airborne isolates, while the carbapenemases search was performed on 15 clinical isolates, 15 surface isolates and 6 airborne isolates. The results obtained, regarding the identification of the isolates, showed the predominance of members of the Enterobacteriaceae family in clinical (48 of 65) and surface (40 of 54) isolates and predominance of members of Staphylococcaceae family (44 of 67) in airborne isolates, with a higher frequency of Escherichia coli (18 of 48) in clinical isolates, Serratia liquefaciens (15 of 40) in surface isolates and Staphylococcus hominis in airborne isolates. Regarding the antimicrobial susceptibility profiles observed, it was highlighted in clinical isolates resistance to AUG (184 of 221) and AML (131 of 221) and lowest resistance to MEM (5 of 221). In surface isolates, there was a greater resistance to AUG (85 of 110) and AML (55 of 110) and lower resistance to IMI (1 of 110), MEM (1 of 110), CIP (3 of 110) and AK (6 of 110). In airborne isolates, there was a greater resistance to AUG (18 of 67) and CIP (18 of 67) in Gram-positives and to ATM (9 of 25) in Gram-negatives. From the interpretation of these profiles, it was possible to determine a total of 82 clinical isolates (37%), 47 surface isolates (42,7%) and 14 air isolates (6,3%) considered multidrug- resistant (MDR). The search for ESBL and carbapenemases in clinical isolates revealed the prevalence of blaCTX-M-G1 (38 of 55) and blaKPC (8 of 15). Contrary to what was observed in clinical isolates, surface isolates revealed the prevalence of blaCTX-M-G8, (16 of 30) blaCTX- M-G9 (15 of 30), blaNDM (9 of 15) and blaVIM (7 of 15). In airborne isolates, this search only yielded a positive result for the presence of blaOXA-48. The results obtained in this work highlight the poresence of MDR pathogens containing important genetic determinants of antimicrobial resistance, not only in patients, but also in different environmental contexts of healthcare units, highlighting not only the role of the patient, but also of healthcare professionals, in the pread of pathogens, elucidating the situation in Portuguese healthcare units, in accordance with what has already been reported in Europe.