Implementation of biomolecular methods to explore the mode of action of Exo-Wound in vitro

Abstract

Este trabalho descreve e apoia cientificamente as atividades realizadas durante o estágio de mestrado na Exogenus Therapeutics. Esta empresa portuguesa possui um produto biológico em desenvolvimento, Exo-Wound, que mostrou acelerar o processo de cicatrização de feridas, estimulando a regeneração da pele. Porém, os mecanismos implícitos aos efeitos benéficos exercidos pela sua substância ativa permanecem parcialmente desconhecidos. Neste contexto, uma das hipóteses de seu modo de ação está relacionada com a modulação da produção de proteínas de matriz extracelular e produção de fatores de crescimento por células da pele, como fibroblastos e queratinócitos. Assim, a implementação e validação de métodos analíticos que permitam a avaliação da expressão e produção destas ou de outras biomoléculas é crucial para compreender o modo de ação deste produto. Esta dissertação de mestrado apresenta os passos realizados necessários à implementação e otimização de métodos biomoleculares, nomeadamente Western Blot, Reverse Transcription Real-time Polymerase Chain Reaction e Imunocitoquímica, no laboratório da Exogenus Therapeutics. Além disso, os resultados aqui apresentados mostram a validação preliminar destas metodologias para a avaliação da expressão e produção de proteínas da matriz extracelular e da expressão de fatores de crescimento por linhas celulares da pele, como fibroblastos e queratinócitos cultivados in vitro.

This work describes and scientifically supports the activities carried out during the master's degree at Exogenus Therapeutics. This Portuguese company has a biological product in development, Exo-Wound, which has shown to accelerate the healing process of wounds, stimulating the regeneration of the skin. However, the mechanisms governing skin regeneration and wound healing acceleration remain partially unknown. In this context, one of the hypotheses of its mode of action is related to the modulation of the production of extracellular matrix proteins and the production of growth factors by skin cells, such as fibroblasts and keratinocytes. Thus, the implementation and validation of analytical methods that allow the evaluation of the expression and production of these biomolecules or others is crucial to understanding the mode of action of this product. This master's thesis presents the steps required to implement and optimize biomolecular methods, namely Western Blot, Reverse Transcription Real-time Polymerase Chain Reaction and Immunocytochemistry, in the laboratory of Exogenus Therapeutics. In addition, the results presented here show the preliminary validation of these methodologies for the evaluation of the expression and production of extracellular matrix proteins and the expression of growth factors by skin cell lines, such as fibroblasts and keratinocytes cultured in vitro.