Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10773/22327
Title: Implementation of mammalian two-hybrid system for highthroughput drugs screening
Other Titles: Implementação do sistema de dois-híbrido em mamífero para rastreio de drogas em grande escala
Author: Patrício, Daniela Marques
Advisor: Fardilha, Margarida Sâncio da Cruz
Guimarães, Ana Sofia da Cunha
Silva, Virgília Sofia Almeida de Azevedo e
Keywords: Interacção celular
Espermatozóides - Mobilidade
Reprodução humana
Defense Date: 6-Oct-2017
Publisher: Universidade de Aveiro
Abstract: The base of cell communication is signalling pathways which, when deregulated can lead to several diseases, from cancer to autoimmune diseases. Protein-protein interactions (PPIs) are the backbone of signalling pathways. Consequently, identifying and modulating PPIs can unravel the pathophysiological mechanisms of a disease. When considering the male reproductive system, the same is observed, hence PPIs are responsible and regulate most of the cellular functions. PPP1CC2 is a testis enriched protein, key to sperm motility acquisition. Its interaction with AKAP4, also a testis-specific protein, appears to be a potential new drug target. Therefore, the modulation of PPP1CC2/AKAP4 interaction under mammalian two-hybrid system is crucial. Two-hybrid system, particularly the mammalian two-hybrid (MTH), is an efficient technique to validate PPIs ex vivo. Thus, we will explore this tool for highthroughput drug screening through the modulation of PPIs. Consequently, it will be used to identify either a target to a specific drug or drugs. This methodology relies on the fact that in eukaryotes, gene transcription only occurs when the DNA-binding domain (BD) and DNA activation domain (AD) of a transcription factor come into close proximity. When fusing the cDNA of two interacting proteins with the BD and AD, a reporter gene is expressed and the interaction can be detected. The main goal of this thesis is to implement the MTH into the Signal Transduction laboratory and to be able to identify and modulate PPIs in a system that can mimic the natural way PPI’s occur – mammalian cells.
A comunicação celular baseia-se em vias de sinalização, que quando desreguladas podem levar ao desenvolvimento de doenças, desde cancro a doenças autoimunes. As interações proteína-proteína (PPIs) são fundamentais para a regulação de vias de sinalização. Deste modo, a identificação e a modulação de PPIs é crucial para entender mecanismos pato-fisiológicos de diferentes doenças. O sistema reprodutor masculino não é exceção, estando as PPIs no centro da manutenção de funções celulares na produção e funcionamento dos gâmetas. A PPP1CC2 é uma proteína com expressão enriquecida nos testículos e a sua interação com a AKAP4, proteína específica de testículo, aparenta ser um bom alvo para novos fármacos. A monitorização da modulação da interação PPP1CC2/AKAP4 através do sistema de dois-híbrido em mamífero (MTH) é crucial. Os sistemas dois-híbrido são técnicas específicas para validar PPIs ex vivo. Desta forma, neste trabalho explorou-se o sistema MTH para uma análise de potenciais drogas para a modulação de PPIs. Isto permitirá identificar um novo alvo terapêutico e/ou desenvolvimento de drogas que afetem especificamente uma PPI. Esta metodologia baseia-se no facto de em eucariotas, a transcrição de genes ocorrer apenas quando o domínio de ligação (BD) e o domínio de ativação (AD) do DNA estão próximos. Ao fundir o DNA complementar de duas proteínas que interagem com o BD e AD, a expressão de um gene repórter é ativada e a interação detetada. O objetivo principal desta tese é implementar o MTH no laboratório de transdução de sinal, para identificar e modular PPIs num sistema que mimetiza o ambiente onde ocorrem PPIs – células de mamíferos.
Description: Mestrado em Biologia Molecular e Celular
URI: http://hdl.handle.net/10773/22327
Appears in Collections:DBio - Dissertações de mestrado
UA - Dissertações de mestrado

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Dissertação_DanielaPatrício.pdf2.34 MBAdobe PDFView/Open


FacebookTwitterLinkedIn
Formato BibTex MendeleyEndnote Degois 

Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.