Concentration and purification of prostate cancer biomarkers envisaging an early diagnosis

Abstract

Nowadays, prostate cancer is the third most common cause of death among men. Currently, there is no effective treatment when the tumor is diagnosed at an advanced stage. Given the high mortality rates associated with cancer, the identification and quantification of tumor biomarkers in human fluids and tissues have been the subject of intense research aiming more reliable diagnoses and to avoid excessive invasive treatments. In recent years, a special interest was also raised on the simultaneous analysis of several biomarkers for the same purpose, i.e., in order to make a more accurate diagnosis. Therefore, certain tumor markers, such as prostate specific antigen (PSA) widely used for the diagnosis of prostate cancer, should be considered together with other relevant biomarkers, like lactate dehydrogenase (LDH), which has recently been indicated as an excellent prognostic and monitoring tool of treatment of the same type of cancer. Considering the current methods for the quantification and purification of these biomarkers, and since both are proteins and are present in complex biological media, they usually exhibit low selectivity and may lead to false positives or negatives. In this context, it is crucial to develop efficient and selective analytical methods for the identification and quantification of several tumor biomarkers present in the same biological sample. For this purpose, aqueous biphasic systems (ABS) composed of ionic liquids (ILs) were investigated as an alternative extraction and purification technique for these biomarkers from synthetic and real biological fluids. In this work, novel ABS capable of extracting and concentrating PSA from human urine, and SAB capable of extracting and purifying LDH from human serum, in a single-step, were identified, allowing thus the identification and quantification of both biomarkers in biological fluids using more expedite analytical equipment, such as size-exclusion high-performance liquid chromatography (SE-HPLC).

O cancro da próstata representa nos dias de hoje a terceira causa de morte mais comum entre os homens, sendo que, atualmente, não existe nenhum tratamento eficaz quando o tumor é diagnosticado já num estado avançado. Tendo em conta as elevadas taxas de mortalidade associadas ao cancro, a identificação e quantificação de biomarcadores tumorais em fluidos e tecidos humanos têm sido alvo de uma investigação intensa no sentido de efetuar diagnósticos mais fiáveis e evitar tratamentos invasivos excessivos. Alguns biomarcadores tumorais, como o antigénio prostático específico (PSA) amplamente utilizado para o diagnóstico do cancro da próstata, podem ser avaliados em conjunto com outros biomarcadores relevantes, surgindo neste sentido a identificação e quantificação da enzima lactato desidrogenase (LDH), que recentemente tem sido sugerida como uma excelente ferramenta de prognóstico e monitorização do tratamento do mesmo tipo de cancro. Tendo em conta que ambos os biomarcadores são proteínas e que os fluidos humanos são matrizes muito complexas, os métodos atuais de identificação e quantificação apresentam pouca seletividade e podem conduzir a falsos positivos ou negativos. Neste sentido, torna-se fundamental desenvolver alternativas eficientes para a identificação e quantificação de vários biomarcadores tumorais presentes na mesma amostra. Para este efeito, avaliaram-se sistemas aquosos bifásicos (SAB) constituídos por líquidos iónicos (LIs) como uma técnica alternativa de extração e purificação de PSA e LDH a partir de fluídos biológicos sintéticos e reais. Neste trabalho identificaram-se SAB promissores capazes de extrair e concentrar PSA a partir de amostras de urina, e SAB capazes de extrair e purificar LDH a partir de amostras de soro humano, num único passo, permitindo portanto a sua identificação e quantificação de ambos os biomarcadores em fluidos humanos por métodos analíticos mais expeditos, tal como cromatografia líquida de alta eficiência por exclusão molecular (SE-HPLC).