Biosensors for the early diagnosis of acute myocardial infarction

Abstract

Acute Myocardial Infarction (AMI) is the leading cause of death and disability in industrialized countries and is expected to become so in emerging countries by 2020. AMI is one of the main diseases with the highest rate of misdiagnosis. Of the majority of patients that arrive to the Emergency Department (ED) with cardiac pain and other symptoms suggestive of myocardial infarction, only a small portion actually may experience an Acute Myocardial Infarction. Therefore, diagnosing Acute Myocardial Infarction within such a large proportion of patients with cardiac pain is indeed a diagnostic challenge. For the correct diagnosis, it is essential to collect blood samples from the patient for the measurement of cardiac biomarkers, namely cardiac troponin I and cardiac troponin T. In this thesis, it is proposed a new type of biosensor for the early and reliable diagnosis of Acute Myocardial Infarction based on the use of metallic nanoparticles attached with aptamers as new Surface Enhanced Raman Scattering (SERS) platforms for the specific detection of cardiac troponin-I. Firstly, gold and silver colloidal nanoparticles (NPs) were synthesized via the classical citrate reduction method and later characterized to assess the quality of the substrate. Larger gold nanoparticles (AuNPs) with sizes ranging from 35-96 nm were also prepared by a seed-mediated growth method. The detection of cardiac troponin I proceeded with the addition of the protein at lower concentrations to the metallic colloids. The final results showed that AuNPs with larger sizes are good candidates to be used as SERS platforms for the detection of cardiac troponin I, because they have presented the highest enhancement of the Raman signals of the protein. These experiments have shown that larger AuNPs are definitely most suitable for this kind of applications. Peak bands were found to be attributed from characteristic bands present in proteins.

O Enfarte Agudo do Miocárdio é a principal causa de morte e de incapacidade nos países desenvolvidos e prevê-se que seja também nos países em desenvolvimento até 2020. O Enfarte Agudo do Miocárdio é uma das principais patologias com a maior taxa de erro no diagnóstico. Entre a maioria de pacientes que se apresenta com dor torácica ou outro sintoma sugestivo de Enfarte Agudo do Miocárdio, apenas uma pequena porção de pacientes realmente manifesta a patologia. Deste modo, diagnosticar um Enfarte Agudo do Miocárdio numa larga proporção de pacientes com dor torácica é de facto um desafio para os clínicos. Para o correto diagnóstico é essencial que se colete uma amostra de sangue do paciente para a medição de biomarcadores cardíacos sobretudo as troponinas cardíacas I e T. Nesta tese propõe-se um novo tipo de biossensor para o diagnóstico precoce e fiável de Enfarte Agudo do Miocárdio que se baseia na funcionalização de aptâmeros à superfície de nanopartículas metálicas como novas plataformas de SERS (Surface Enhanced Raman Scattering) para a deteção específica da troponina cardíaca I. Numa primeira fase, nanopartículas de ouro e de prata foram sintetizadas pela via clássica de redução com citrato e subsequentemente caracterizadas para determinar a qualidade dos substratos obtidos. Nanopartículas com tamanhos que rondam os 35-96 nm foram igualmente sintetizadas pelo processo de crescimento mediado por sementes. A deteção da troponina cardíaca I passou pela adição de baixas concentrações de proteína aos coloides metálicos. Os resultados finais demonstraram que as nanopartículas de ouro com tamanhos superiores aparentam ser bons candidatos a substratos para SERS para a deteção da troponina cardíaca-I, uma vez que apresentaram melhor intensificação de sinais de Raman da proteína. Estes testes permitiram concluir que as nanopartículas de ouro de maiores dimensões são de facto mais adequadas para este tipo de aplicações. Os picos obtidos podem ser atribuídos a bandas características encontradas nas proteínas.