Efeitos citotóxicos da fisetina e etoposido na linha de osteossarcoma MG-63

Abstract

O osteossarcoma é o tipo mais comum de tumor ósseo maligno de alto grau que ocorre em crianças e adolescentes, sendo caracterizado por baixa resposta aos tratamentos atuais. A diminuição da eficácia dos quimioterápicos, devida à resistência adquirida pelas células tumorais, torna necessário encontrar novos fármacos que melhorem o resultado dos tratamentos. A fisetina é um flavonóide com reconhecidas propriedades antioxidantes e antiinflamatórias e referenciada pelas suas capacidades anticancerígenas e antiinvasivas. O objetivo deste estudo consiste em avaliar o efeito citotóxico da fisetina em células MG-63, isolado e combinado com etoposido, a par da sua influência na progressão do ciclo celular. Para tal, a linha de osteossarcoma humano MG-63 foi tratada com diferentes concentrações de fisetina, etoposido e combinações ao longo de 48h. Os efeitos citotóxicos foram analisados através de três ensaios distintos: o ensaio 3-(4,5-dimetil-tiazol-2-il)-2,5- difeniltetrazólio (MTT), o ensaio violeta de cristal (CV) e o ensaio clonogénico. O ciclo celular foi analisado por citometria de fluxo e os níveis de expressão dos genes que regulam este ciclo foram determinados por qPCR. Os compostos isolados e combinados apresentaram um efeito negativo na proliferação celular, induziram alterações na dinâmica do ciclo celular das células MG-63 e aumentaram a percentagem de células em fase G2. Os níveis de expressão de CDK1 (p<0,05) e CDK2 foram diminuídos pela fisetina e pela combinação com menor concentração de etoposido. Estas observações apontam a fisetina como um potencial agente contra o osteossarcoma em terapias combinadas. No entanto, são necessários mais estudos para clarificar o modo de ação deste flavonóide no osteossarcoma.

Osteosarcoma is the most common type of high-grade malignant bone tumor occurring in children and adolescents, being characterized by having poor response to current therapeutics. The diminished effectiveness of cytotoxic drugs due to acquired resistance leads to the necessity of finding new therapeutic agents with improved outcome. Fisetin is a flavonoid with recognized antioxidant and anti-inflammatory properties and has been reported to possess anticancer and anti-invasive capabilities. The aim of this study is to evaluate the cytotoxic effects of fisetin in MG-63 cells, alone and in combination with etoposide, and its influence on cell cycle progression. For this, MG-63 human osteosarcoma cell line was treated with different concentrations of fisetin, etoposide and combinations for a period of 48 h. Three different assays were used to analyze the cytotoxic effects: the 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5- diphenyl tetrazolium bromide (MTT) assay, the crystal violet (CV) assay and the clonogenic assay. Cell cycle was assayed by flow cytometry and expression levels of the cell cycle genes were analyzed by qPCR. Isolated and combined compounds showed negative effects on cell proliferation, induced alterations on cell cycle of MG-63 cells and increased the percentage of cells in G2 phase. Expression levels of CDK1 (p<0,05) and CDK2 were decreased by fisetin and combination with less concentration of etoposide. These observations point to fisetin as a potential agent against osteosarcoma in combination therapies. However, further studies are needed to clarify the mode of action of this flavonoid in osteosarcoma.