aCGH no diagnóstico pré-natal de fetos com anomalias ecográficas

Abstract

Objetivos. A hibridização genómica comparativa baseada na tecnologia dos microarrays (aCGH) é uma nova técnica, que tem sido apontada como alternativa à citogenética convencional na rotina do diagnóstico pré-natal, principalmente nas gestações com anomalias ecográficas. Assim, este estudo pretende avaliar o impacto do aCGH na rotina do DPN em fetos com anomalias ecográficas. Também visa capacitar quais as estratégias que permitem uma redução nos resultados com significado clínico incerto ou desconhecido. Métodos. O DNA fetal foi extraído a partir da cultura celular de líquido amniótico ou vilosidades coriónicas. As 22 amostras foram analisadas por aCGH de oligonucleótidos com 60K e a classificação das CNV’s foi feita de acordo com a classificação adotada pelo Laboratório de Citogenética e Genómica da Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra para análise e interpretação das CNV’s no diagnóstico pós-natal. Por fim, de modo a reduzir os resultados com significado clínico incerto ou desconhecido, foram adotadas 2 estratégias de seleção de CNV’s. Resultados. No total dos casos analisados, em 10,5% (2/19) foram detetadas CNV’s patogénicas adicionais ao resultado fornecido pela citogenética convencional. Englobando apenas os casos com indicação de anomalias ecográficas e resultado citogenético normal, o aCGH detetou CNV’s patogénicas em 5,9 % (1/17) dos casos. A percentagem inicial de casos com CNV’s de significado clínico incerto ou desconhecido foi de 31,6% (6/19), reduzida posteriormente para 15,8% (1/19) quando consideradas apenas as CNV’s inferiores as 400 Kb que tivessem associadas às anomalias ecográficas encontradas, ou para 10,5% (12/19) quando consideradas apenas as CNV’s com o mínimo de 8 sondas consecutivas alteradas. Conclusão. Os resultados deste estudo demonstram que o aCGH pode ser uma ferramenta valiosa no DPN de casos com indicação de anomalias ecográficas, e na caracterização de rearranjos cromossómicos detetados por citogenética convencional. Será necessário, no entanto, definir padrões de análise e interpretação para a tecnologia de aCGH, pelo que mais estudos retrospetivos terão de ser realizados.

Objectives. The comparative genomic hybridization based on microarrays technology (aCGH) is a new technique, which has been identified as an alternative to conventional cytogenetic in routine prenatal diagnosis, mainly in pregnancies with ultrasound abnormalities. Therefore, this study aims to assess the impact of aCGH in routine prenatal diagnosis in fetus with malformations and to evaluate the strategies to enable a reduction in the results of uncertain clinical significance or unknown clinical significance. Methods. The fetal DNA was extracted from cell culture of amniotic fluid or chorionic villi samples. The 22 samples were analyzed by aCGH oligonucleotide 60K and classification and interpretation of CNV's was made according to the classification adopted in postnatal diagnosis by the Laboratory of Cytogenetic and Genomic Faculty of Medicine, University of Coimbra. Then, two strategies were adopted for selection of CNV's described in the literature in order to reduce the results of uncertain or unknown clinical significance. Results. In all cases analyzed, 10.5% (2/19) were classified as pathogenic CNV's, not detectable by conventional cytogenetic. Incorporating only cases with ultrasound abnormalities and normal cytogenetic result the aCGH detected CNV's pathogenic in 5.9% (1/17) of the cases. The initial percentage of cases with CNV's of uncertain or unknown clinical significance was 31.6% (6/19), subsequently reduced to 15.8%, when considered only the CNV's with sizes lower than 400 Kb that had been associated with sonographic abnormalities found, or to 10.5% when only considered the CNV's at least with 8 consecutive probes changed. Conclusion. Altogether, the results of this study demonstrate that aCGH can be a valuable tool in prenatal diagnosis in the cases with ultrasound abnormalities indication, and in the characterization of chromosomal rearrangements detected by conventional cytogenetic. However, is necessary the elaboration of universal guidelines for analysis patterns and interpretation of aCGH results, whereby more retrospective studies will be performed.