Optimização da produção de scFv anti-LDL(-) por Pichia pastoris

Abstract

Foram avaliadas, em frasco Erlenmeyer e em bio-reactor, as vantagens da alimentação escalonada de fontes de carbono, glicerol e sorbitol, complementares ao metanol na fase de indução de produção. A concentração máxima do fragmento de anticorpo monoclonal recombinante scFv anti-LDL(-) obtida após 120h de tempo de cultivo foi de 148,7 ± 18,3 mg.L-1 para os cultivos aos quais foi adicionado glicerol, assim como a concentração celular mais elevada no final do cultivo, de 15,6 ± 1,1 g.L-1. Nos estudos realizados em bio-reactor, observou-se uma taxa específica de crescimento máxima de μmáx=0,43h-1, nas primeiras 6h de cultivo. No final do tempo de cultivo, foram obtidas concentrações celulares na ordem dos 30 g.L-1. Estudo adicional foi realizado para avaliar a influência de casminoácidos e FenilMetanoSulfonilFluoreto (PMSF) na produção de scFv ant-LDL(-). A adição de casaminoácidos revelou-se mais significativa do que a adição de PMSF, na produção de scFv anti-LDL(-).

It was studied, in shake flask and bioreactor, the advantages of mixed feeds of sorbitol or glycerol with methanol in the induction phase for production of recombinant monoclonal antibody fragment scFv anti-LDL(-) with Pichia pastoris. The maximum scFv anti-LDL(-) concentration of 148,7 ± 18,3 mg.L-1 was obtained for the glycerol feed strategy, as well as the highest cell density, 15,6 ± 1,1 g.L-1. In bioreactor, it was observed the exponential growth phase at first 6h of culture, with a maximum specific growth rate of μmax=0,43h-1. The highest cell density achieved was about 30 g.L-1. An additional study was performed to evaluate the influence of casaminoacids and PhenylMethaneSulfonylFluoride (PMSF) in the production of scFv anti-LDL(-). In comparison with PMSF, it was observed that casaminoacids have the most significant influence and its presence induce a higher protein production.