Analysis of black tea by two-dimensional liquid chromatography

Abstract

O chá (Camellia sinensis) é uma das bebidas mais consumidas no mundo, existindo vários processos de produção que originam os diversos tipos de chá comummente conhecidos: verde (não fermentado), oolong (semi - fermentado) e preto (fermentado). Actualmente, assiste-se a um amplo debate acerca das alegadas propriedades anti-oxidantes, anti-carcinogénicas e anti-inflamatórias de diversos tipos chás. É pois compreensível que a caracterização de chás, com vista ao conhecimento integral dos seus potenciais benefícios na saúde, seja um tópico de interesse não só do ponto de vista académico, mas também para os operadores da indústria do chá. Este trabalho pretende mostrar a viabilidade e as vantagens da aplicação da técnica de cromatografia líquida bidimensional compreensiva para a separação dos compostos existentes em amostras de chá preto. Para o efeito, foram desenvolvidas duas metodologias de eluição utilizando, na primeira dimensão, uma coluna com fase estacionária de modo misto de fase reversa/troca aniónica (Acclaim Mixed-Mode WAX-1, denominação em inglês) e, na segunda dimensão, uma coluna de fase reversa convencional de octadecil sílica (C18). O sistema separativo bidimensional foi acoplado a um detector de fotodíodos e a um detector de fluorescência molecular, em série. A qualidade de separação cromatográfica dos compostos, assim como, a ortogonalidade do sistema foram avaliadas utilizando funções matemáticas previamente desenvolvidas.

Tea (Camellia sinensis) is one of the most widely consumed beverages in the world. Depending on the production process, there are three types of tea available: green (unfermented), oolong (semi - fermented) and black (fermented). Currently, there is a large discussion about the alleged anti-oxidant, anti-carcinogenic, and anti-inflammatory properties of various types teas. It is, therefore, understandable, that the characterization of tea has become a topic of interest not only from an academic point of view, but also for those working in tea industry. Therefore, this work aims at showing the application of comprehensive two-dimensional liquid chromatography for the separation of compounds contained in black tea samples. For accomplishing this objective, two methodologies of elution have been developed comprising, in the first dimension, a mixed-mode reversed-phase/anionic change column (Acclaim Mixed-Mode WAX-1) and, in the second dimension, a conventional C18 reversed-phase column. The comprehensive two-dimensional chromatographic system was coupled to a photodiode array and fluorescence detectors, in series. The quality of chromatographic separation of the compounds, as well as the orthogonality of the system were evaluated by applying mathematical functions previously developed.