Análise filogenética de péptidos salivares

Abstract

A saliva é um fluido corporal presente na cavidade oral importante para a proteção e manutenção da integridade da parte superior da mucosa do sistema digestivo. Estas propriedades estão associadas à sua composição proteica, nomeadamente em péptidos salivares como estaterina, histatinas, proteínas ricas em prolina (PRPs) e cistatinas. Apesar de já caracterizadas funcionalmente no Homem, pouco ou nada está descrito quanto à sua presença/função em outras espécies animais. Neste contexto, a análise filogenética dos péptidos salivares parece ser relevante para a compreensão dos processos fisiológicos nos quais participam. Assim, o principal objectivo da presente dissertação consistiu em encontrar novos péptidos salivares em mamíferos, homólogos com péptidos salivares encontrados em humanos com recurso a ferramentas filogenéticas, como o BLAST, alinhamento múltiplo, construção e avaliação de árvores filogenéticas. De forma a validar os resultados obtidos, procedeu-se à análise por espectrometria de massa de amostras de saliva recolhidas das espécies: Oryctolagus cuniculus, Canis familiaris, Rattus novergicus e Ovis aries. Na pesquisa de péptidos salivares foram encontradas 140 sequências da família das PRPs, 49 sequências da família das histatinas/estaterinas e 62 sequências da família das cistatinas, tendo sido identificados 75 novos péptidos nestas famílias. Destes novos péptidos detectados por análise filogenética é de salientar um péptido homólogo às estaterinas identificado na saliva de Canis Familiaris que propomos como uma nova estaterina nesta espécie.

Saliva is a bodily fluid present in the oral cavity important for protection and maintenance of upper digestive system’s mucosa integrity. These properties are related with the salivary protein composition with emphasis to statherin, histatins, proline rich proteins (PRPs) and cystatins. Although characterized in the human specie, few is known about their presence/function in other animal species. Thus, phylogenetic analysis of salivary peptides seems relevant to the comprehension of their physiological role. So, the main goal of the present dissertation was to find new salivary peptides in other species using phylogenetic tools, like BLAST, multiple alignment, construction and evaluation of phylogenetic trees. In order to validate phylogenetic analysis findings, mass spectrometry analysis was performed to identify those peptides in the salivary samples collected from: Oryctolagus cuniculus, Canis familiaris, Rattus novergicus e Ovis aries. With this approach, 140 sequences of salivary peptides from the PRPs family were identified, together with 49 sequences of the histatin /statherin family and 62 sequences of the cystatin family, with 75 new peptides found in these different families. Among these we found a peptide homologous to statherin in the saliva of Canis familiaris. that we propose as a new statherin in this specie.