Phospholipid profile of different breast cancer cell lines

Abstract

Breast cancer is the leading cause of cancer-related death in women. Altered cellular functions of cancer cells lead to uncontrolled cellular growth and morphological changes. Cellular biomembranes are intimately involved in the regulation of cell signaling; however, they remain largely understudied. Phospholipids are the main constituents of biological membranes and play important functional, structural and metabolic role. The aim of this work was to establish if phospholipids profiles of mouse and human mammary epithelial cells and breast cancer cells differ in relation to morphology and degree of differentiation. For this purpose, phospholipids of cell lines were analyzed using a lipidomic approach. Briefly phospholipids were extracted from six different cell lines (three from mouse and three from human) using Bligh and Dyer method, followed by a separation of phospholipid classes by thin layer chromatography. Phospholipid classes were quantified by phosphorus assay and analyzed by mass spectrometry. Important differences and similarities were found in the relative phospholipid content between mouse and human cells, between non-tumorigenic and cancer cells and between breast cancer cells with different levels of aggressiveness. Mass spectrometry and quantification analysis showed substantial alterations in the profile of sphingomyelin, cardiolipin and phosphatidylinositol classes comparing non-tumorigenic with cancer cells. Alterations in the most aggressive cell lines were observed in lysophosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine and phosphatidic acid classes. Taken together, the results indicate that changes in phospholipid profile, either from mouse and human cell lines, can be associated to the difference in cell morphology, behavior and genetic expression, directly related to enzymatic and metabolic activities known to be altered in cancer. Thus, identification of phospholipid classes and their structure open new possibilities for exploration of such characteristics in cancer and provide novel biomarkers and disclose metabolic pathways with potential for therapy.

O cancro da mama é a principal causa de morte por cancro nas mulheres. Alterações nas funções celulares de células cancerígenas levam a um crescimento celular descontrolado e mudanças morfológicas nestas. Membranas celulares estão intimamente envolvidas na regulação da sinalização celular; no entanto ainda muito está por compreender. Fosfolípidos são os principais constituintes das membranas biológicas e possuem um papel importante a nível funcional, estrutural e metabólico. O objectivo deste trabalho foi compreender se os perfis fosfolípidos de células epiteliais e de cancro da mama de ratinho e humanas diferem em relação a morfologia e grau de agressividade das células. Para este objectivo os fosfolípidos de linhas celulares foram analisados usando uma abordagem lipidómica. Brevemente, os fosfolípidos foram extraídos de seis linhas celulares diferentes (três de ratinho e três humanas) usando o método de Bligh and Dyer, seguida de uma separação das classes de fosfolípidos por cromatografia em camada fina. As diferentes classes de fosfolípidos foram quantificadas pela quantificação de fósforo e analisadas por espectrometria de massa. Diferenças e semelhanças importantes foram encontradas n entre células de ratinho e humanas, entre células não tumorais e células cancerígenas e entre células do cancro da mama com diferentes graus de malignidade. A espectrometria de massa e a análise por quantificação mostraram alterações no perfil das classes esfingomielina, cardiolipina e fosfatidilinositol. Alterações nas células mais agressivas foram observadas nas classes lisofosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina e ácido fosfatídico. Concluindo, os resultados indicam que as diferenças no perfil fosfolipídico tanto em células de ratinho como células humanas, podem ser associadas a morfologia, comportamento e expressão genética da célula, directamente relacionado com actividades enzimáticas e metabólicas que são conhecidas de estarem alteradas no cancro. Assim, a identificação das classes de fosfolípidos e sua estrutura abrem novas possibilidades para a exploração destas características no cancro e providenciam potenciais biomarcadores divulgando vias metabólicas com potencial para a terapia.