Estudo do efeito de extrato de chá verde no cancro da mama: monitorização in vitro e em modelo animal

Abstract

Dados estatísticos recentemente divulgados pela Organização Mundial de Saúde revelam que o cancro corresponde à principal causa de morte na sociedade atual, destacando-se, o diagnóstico prevalente de cancro da mama, no sexo feminino. Esta doença oncológica tem preferencial propensão para a metastização óssea, a qual apresenta uma significativa mortalidade. Assim, o desenvolvimento da presente dissertação sustenta-se quer na relevância da investigação de terapêuticas que aliam eficácia à redução do seu efeito citotóxico, quer no estudo de metodologias capazes de promover um diagnóstico precoce. O chá verde apresenta na sua constituição várias catequinas, às quais estão associados mecanismos antioxidantes, anti-inflamatórios e antimutagénicos. Como tal, avaliou-se in vitro, com a linha celular MCF-7, o potencial adjuvante do extrato de chá verde (GTE po), quando combinado com terapêuticas utilizadas em contexto clínico. Através do método colorimétrico de avaliação da viabilidade celular MTT, comprovou-se que o GTE po exibe, isoladamente, ação terapêutica com uma probabilidade de 66%. Quando associado ao tratamento clínico direcionado à doença oncológica em estudo, o GTE po apresenta resultados promissores, nomeadamente nos protocolos: Paclitaxel + Gemcitabina; Docetaxel + Gemcitabina; 5-FU + Metotrexato + Ciclofosfamida; Denozumab; Vincristina + Epirrubicina + Ciclofosfamida. De forma complementar, desenvolveram-se ensaios in vivo, através da seleção de um modelo animal em murganho (da estirpe Balb/c nude) - indução nãoortotópica de tumor primário da mama e de simulação de metástases ósseas - com recurso à inoculação de células MCF-7. A sua monitorização foi realizada através da aquisição de imagens PET, utilizando o sistema easyPET.3D, com recurso aos radiofármacos [¹⁸F]-FDG e [¹⁸F]-NaF. A tecnologia easyPET demonstrou a sua enorme relevância ao longo do presente estudo, tendo sido capaz de detetar estádios muito precoces do desenvolvimento tumoral e de monitorizar a resposta à terapêutica administrada. Quanto ao impacto do tratamento, o modelo de indução de metástases ósseas, submetido à ação do Vincristina e do GTE po, apresentou uma redução dos valores de SUVmédio e uma diminuição da captação de [¹⁸F]-NaF, ao fim de 3 ciclos de tratamento, o que permite constatar a ocorrência de uma regressão tumoral, tal como comprovam os resultados histológicos obtidos. Este animal apresentou, ainda, a recuperação da sua massa corporal, entre os ciclos intermédios de tratamento, o que pode estar relacionado com a administração diária de GTE po, cujas propriedades apontam para um incremento a sua qualidade de vida. Por outro lado, o modelo não-ortotópico de tumor primário da mama não permitiu avaliar a eficácia da terapêutica administrada (Docetaxel + GTE po). Contudo, sustenta o papel determinante do sistema easyPET.3D em contexto pré-clínico.

Recent statistical findings disclosed by the World Health Organization reveal that cancer is the leading cause of mortality in modern society, with breast cancer being the most prevalent within the female population. This oncological disease has a particular predisposition to bone metastasis, which presents a significant mortality rate. As such, the development of this dissertation focuses on the relevance of exploring therapies which combine effectiveness with reduced cytotoxicity, as well as investigating methodologies capable of promoting early diagnosis. Green tea contains several catechins, which possess antioxidant, anti-inflammatory and anti-mutagenic properties. Therefore, the adjuvant potential of Green Tea Extract powder (GTE po) was evaluated in vitro with the MCF-7 cell line, in combination with therapies commonly employed in clinical settings. The colorimetric method for evaluating cell viability MTT demonstrated that GTE po, in isolation, exhibits a therapeutic action with a probability of 66%. When coupled with clinical treatment directed to the oncological disease under analysis, the GTE po shows promising results, particularly in the protocols: Paclitaxel + Gemcitabine; Docetaxel + Gemcitabine; 5-FU + Methotrexate + Cyclophosphamide; Denozumab; Vincristine + Epirubicin + Cyclophosphamide. Additionally, in vivo tests were developed through the selection of an animal model in nude Balb/c mice - a non-orthotopic model of primary breast tumour and a model of bone metastasis induction simulation - by inoculating MCF-7 cells. Tumour monitoring was performed via PET imaging, using the easyPET.3D system, with the radiopharmaceuticals [¹⁸F]-FDG and [¹⁸F]-NaF. The easyPET technology demonstrated its remarkable importance throughout this study, being able to detect very early stages of tumour development and to assess the response to the administered therapy. Regarding the model of induction of bone metastases, submitted to the action of Vincristine and GTE po, a reduction in mean SUV values and a decrease in [¹⁸F]-NaF uptake was observed after 3 cycles of treatment. These results are consistent with the occurrence of tumour regression, as confirmed by the histological evidence. This animal also presented a recovery of its body mass, between the intermediate cycles of treatment. This may be related to the daily administration of GTE po, whose properties suggest an increase in its quality of life. On the other hand, the nonorthotopic model of primary breast tumour did not enable the evaluation of the efficacy of the administered therapy (Docetaxel + GTE po). However, it supports the decisive role of the easyPET.3D system in a pre-clinical context.