Contribuição da imunofenotipagem para o diagnóstico da Síndrome Mielodisplásica

Abstract

A Síndrome Mielodisplásica (SMD) constitui um grupo heterogéneo de neoplasias mielóides caraterizados por alterações nos processos de diferenciação e maturação celular. O contributo da citometria de fluxo no diagnóstico da patologia ainda não está bem estabelecido, contudo, desde 2014 o International Leukemia Net European Working Group recomenda a integração da técnica para o diagnóstico destas entidades. Quer a morfologia quer a imunofenotipagem tentam encontrar rasgos displásicos nas linhas maioritárias da medula óssea (MO). Neste contexto, o objetivo deste estudo incidiu na análise das linhas minoritárias da MO como a linha a basófilo, eosinófilo, célula dendrítica plasmacitóide e mastócito, de forma a verificar se estas são fenotipicamente diferentes na hematopoiese normal ou displásica. As amostras analisadas (n=84) encontravam-se distribuídas, de acordo com a classificação da Organização Mundial de Saúde, em: 8 CRDU, 45 CRDM, 17 AREB-1 e 14 AREB-2. Baseado no International Prognostic Scoring System, 18 foram classificadas como de Baixo risco, 19 como de risco Intermédio1 e 16 como de risco Intermédio2-Alto. Paralelamente, analisaram-se 14 MO normais/reativas. Nas diferentes linhas hematopoiéticas estudadas, foi calculada a percentagem de células nos diferentes estadios maturativos e a expressão dos recetores: CD10, CD11b, CD13, CD33, CD34, CD35, CD44, CD45, CD64, CD117, CD123, CD133 e HLA-DR. Procedeu-se à análise da expressão dos genes Triptase e Peroxidase do Eosinófilo para amostras de basófilos e eosinófilos, correspondentemente, em 9 amostras diagnosticadas com SMD e em 5 MO normais/reativas. Observou-se um aumento da expressão de CD44 e CD45 transversal às linhas hematopoiéticas estudadas, um aumento de expressão de CD117 e HLA-DR na linha a mastócito, uma diminuição de CD13 na linha a basófilo e de CD35 e CD64 na linha a eosinófilo. Na análise da expressão génica, observou-se um aumento de expressão dos genes Triptase e Peroxidase do Eosinófilo para as populações de basófilos e eosinófilos, respetivamente, nas amostras da SMD. Os resultados obtidos claramente demonstram padrões alterados nas linhas hematopoiéticas estudadas consistentes com os publicados para a linha granulocítica, monocítica e eritroide, reforçando o contributo da citometria de fluxo para o diagnóstico e estratificação prognóstica dos doentes com SMD.

The Myelodysplastic Syndrome (MDS) is a heteregeneous group of myeloid neoplasms characterized by changes in the differentiation and maturation of myeloid cells. The contribution of immunophenotyping for the diagnosis of MDS is not well established, however, since 2014 the International Leukemia Net European Working Group recomends the integration of flow cytometry for the diagnosis of these entities. Either morphology or immunophenotyping try to find dysplastic rips in the majority hematopoietic lineages of bone marrow (BM). In this context, the aim of this study was to look into the BM minority lineages from MDS patients, such as basophil, eosinophil, plasmacytoid dendritic cells and mast cell lineage, in order to verify if they are phenotypically different from normal/reactive bone marrow BM. MDS patients were distributed (n=84), according to the World Health Organization classification as: 8 RCUD, 45 RCMD, 17 RAEB-1 and 14 RAEB-2. Based on the International Prognostic Scoring System, 18 cases were Low risk MDS, 19 were intermediate risk-1 and 16 had classified as intermediate risk-2 and high-risk. Additionally, we analysed 14 normal/reactive BM. In the different hematopoietic lineages, the percentage of cells in different maturation stages and expression of several receptors, like CD10, CD11b, CD13, CD33, CD34, CD35, CD44, CD45, CD64, CD117, CD123, CD133 and HLA-DR were studied. We analysed the Tryptase and Eosinophil Peroxidase gene expression to basophils and eosinophils population, respectively, in 9 MDS samples and in 5 normal/rective BM. There were an increased expression in CD44 and CD45 in all hematopoietic lineages under study, an increased expression in CD117 and HLA-DR in mast cel lineage, a decresead expression in CD13 in basophil lineage and in CD35 and CD64 in eosinophil lineage. In gene expression analysis there were, in MDS samples, an increased expression in Tryptase and Eosinophil Peroxidase genes for basophils and eosinophils populations, respectively. Regarding our results, there were immunophenotypic and functional differences in hematopoietic lineages studied consistent with those published to granulocytic, monocytic and erythroid lineages. This enhancing the contribution of flow cytometry for the diagnosis and prognostic stratification of MDS patients. Índice