Validação de um método de HPLC para análise de conteúdo em comprimidos

Abstract

O presente trabalho descreve o desenvolvimento e validação de um método analítico para análise de conteúdo de substância activa em comprimidos revestidos de Blue025 (formulação final a ser comercializada). O método foi desenvolvido tomando como ponto de partida as condições definidas pelo fabricante da substância activa, sendo que a melhor separação de todos os componentes da amostra foi conseguida com uma coluna Zorbax SB-Phenyl, 3.5μm, 150 x 4.6mm e recorrendo a um programa de gradiente de duas fases móveis, com um fluxo constante e igual a 1.0 ml/min. A validação do método foi realizada de acordo com as diretrizes ICH. Foram realizados testes de filtração, seletividade, linearidade, rigor, precisão, robustez e estabilidade. Após os testes de filtração verificou-se que para a preparação das amostras deve ser utilizada a centrifugação a 4000rpm durante 10min. Não foi observada interferência de qualquer constituinte da amostra na análise de Blue025, pelo que ficou demonstrado tratar-se de um método seletivo. O método apresenta uma resposta linear para uma gama de concentrações de 60% a 140% (100% <=> concentração de Blue025 de 0.2mg/ml), tanto para as soluções padrão como para as amostras de fórmula reconstituída. Os testes de rigor demonstraram que o método é rigoroso e através da avaliação da precisão do sistema verificou-se que o sistema cromatográfico usado para a análise é preciso na aplicação do método analítico. Tanto as soluções padrão como as amostras apresentaram uma estabilidade de pelo menos 48h nas condições ambiente. O método demonstrou ser robusto para volumes de injeção de 5μL e 15μL, para fluxos de 0.8ml/min. e para temperaturas da coluna de 36ºC e 44ºC. Neste sentido, o método definido para avaliação do conteúdo de substância ativa em comprimidos revestidos de Blue025 está adequado para a finalidade a que foi proposto, e portanto é válido para a referida análise.

This work describes the development and validation of an analytical method defined to be used for the evaluation of assay of drug substance in Blue025 film-coated tablets (final formulation to be marketed). The method was developed using the conditions set by drug substance manufacturer as a starting point, and the best separation of all components of the sample was achieved with a Zorbax SB-Phenyl, 3.5μm, 150×4.6mm column and using a program gradient of two mobile phases with a constant flow of 1.0ml/min. The method validation was performed according to ICH guidelines. Filtration, selectivity, linearity, accuracy, precision, robustness and stability tests were performed. Filtration tests showed that centrifugation at 4000rpm for 10min. should be used for the samples preparation. There was no interference of any constituent of the sample in Blue025 analysis, demonstrating that the method is selective. The method shows a linear response for a range of concentrations from 60% to 140% (100% <=> concentration of Blue025 of 0.2mg/ml) for standard solutions and for reconstituted formula samples. The accuracy tests demonstrated that the method is rigorous and the evaluation of the system precision showed that the chromatographic system used is accurate applying the analytical method. Standard solutions and reconstituted formula samples are stable at least 48 hours at room conditions. The method proved to be robust for injection volumes of 5μL and 15μL, flow of 0.8mL/min. and for column temperatures of 36ºC and 44ºC. In this sense, the method defined for the assay evaluation of the drug substance in Blue025 film-coated tablets complies with its purpose and therefore is valid for the referred analysis.