Natural organic matter: study by two-dimensional liquid chromatography

Abstract

For the purpose of resolving the chemical heterogeneity of natural organic matter (NOM), comprehensive two-dimensional liquid chromatography (LC x LC) was employed for the first time to map the hydrophobicity and polarity vs. molecular weight (MW) distribution of the following complex organic mixtures: Suwannee River (SR-FA) and Pony Lake (PL-FA) Fulvic Acids, both obtained from the International Humic Substances Society, and water-soluble organic matter (WSOM) from atmospheric aerosols. Two methods have been developed using either a conventional reversed-phase silica column (RP-C18) or a mixed-mode hydrophilic interaction column (mixed-mode HILIC) in the first dimension, and a size-exclusion column (SEC) in the second dimension. The RP-C18 x SEC and mixed-mode HILIC x SEC fractions were screened on-line by UV at 254 nm, molecular fluorescence at excitation/emission wavelengths (Exc/Em) of 240/450 nm, and by evaporative light scattering. The MW distributions of these NOM samples were further characterized by number average molecular weight (Mn), weight average molecular weight (MW), and polydispersity (Mn/Mw). Findings suggest that the combination of two independent separation mechanisms is promising in extend the range of NOM separation. The complete range of Mw values obtained in this study varied within 745-2122 Da, 637-1950 Da, and 157-891 Da for the SR-FA, PL-FA and WSOM, respectively. The obtained results were associated to the different origin and formation pathways of the three NOM samples, which strongly influence their chemical composition and MW distribution.

Com o objetivo de avaliar a heterogeneidade química da matéria orgânica natural (MON), foi aplicada pela primeira vez a técnica de cromatografia líquida compreensiva bidimensional (CL x CL) a três misturas orgânicas complexas: ácidos fúlvicos do Rio Suwannee (AF-RS) e do Lago Pony (AF-LP), ambos obtidos da Sociedade Internacional de Substâncias Húmicas, e matéria orgânica solúvel em água (MOSA) de aerossóis atmosféricos. Com esta nova técnica analítica, pretendeu-se efectuar a separação cromatográfica das amostras de MON tendo em conta a hidrofobicidade e polaridade vs. massa molar. Para o efeito, foram desenvolvidos dois métodos distintos, utilizando na primeira dimensão ou uma coluna de fase reversa convencional (C18) ou uma coluna de interação hidrofílica/fase reversa (HILIC, sigla inglesa), e na segunda dimensão uma coluna de exclusão por tamanhos (SEC, sigla inglesa). Os perfis cromatográficos das frações resultantes dos sistemas C18 x SEC e HILIC x SEC foram registados por três detetores: UV a 254 nm, fluorescência molecular a comprimentos de onda de excitação/emissão (Exc/Em) de 240/450 nm e detector evaporativo de dispersão de luz. A distribuição da massa molar das amostras foi caracterizada pelas grandezas massa molar média em número (Mn), massa molar média em peso (Mw), e índice de polidispersão (Mn/Mw). Os resultados obtidos sugerem que a combinação de dois mecanismos de separação independentes constitui um método promissor na separação de amostras de MON. A distribuição de Mw obtida neste estudo foi de 745 a 2122 Da, 637 a 1950 Da e 157 a 891 Da para as amostras de AF-RS, AF-LP e MOSA de aerossóis atmosféricos, respectivamente. A gama de valores obtidos para a distribuição de Mw foram associados às diferentes origens e mecanismos de formação das amostras de MON, os quais podem influenciar a respectiva composição química e distribuição de tamanhos moleculares.