Isolamento e identificação molecular de micobactérias não tuberculosas

Abstract

As micobactérias não tuberculosas (MNT) são agentes ubíquos no ambiente, tendo sido isoladas na água, (incluindo água canalizada), no solo e nos animais, apresentando patogenicidade variável. As MNT podem ser classificadas com base em características culturais, como a produção de pigmentos e a velocidade de crescimento (MNT de crescimento rápido ou lento) ou pela sua capacidade de causar doença no homem. As MNT potencialmente patogénicas podem causar uma variedade de doenças que diferem em severidade e importância. Geralmente as doenças disseminadas em pacientes portadores de SIDA estão associadas a espécies de crescimento lento enquanto as infecções pós-traumáticas são causadas por espécies de crescimento rápido. Tem-se verificado um aumento progressivo da importância das micobactérias não tuberculosas. O isolamento cada vez mais frequente das diferentes espécies não tuberculosas, associado ao desenvolvimento de novas técnicas laboratoriais, originou também um aumento do diagnóstico de infecções por estas micobactérias. Assim torna-se fundamental avaliar em que medida o isolamento de micobactérias não tuberculosas é importante para o estabelecimento do diagnóstico da doença e para a determinação do plano terapêutico. O objectivo deste trabalho foi avaliar a importância da detecção e identificação molecular de micobactérias não tuberculosas, de forma a estabelecer o diagnóstico e estratégia terapêutica nos doentes infectados. Neste estudo foram usadas as MNT isoladas no Serviço de Microbiologia dos Hospitais da Universidade de Coimbra, EPE durante o período de 2006-2010. As amostras positivas para MNT foram identificadas através de dois métodos moleculares, o sistema Inno-lipa micobactérias da Innogenetics e o sistema Accuprobe da Gen-Probe. Foram identificadas 433 estirpes de micobactérias das quais 108 eram micobactérias não tuberculosas. Das amostras com culturas positivas para MNT apenas 5% foram positivas no exame directo positivo. As estirpes do Complexo Mycobacterium avium (MAC) foram as mais frequentes, seguidas pelo M. fortuitum e M. chelonae. As MNT identificadas causaram doença em 25% dos casos. O agente prevalente nos casos de doença foi o MAC, provocando doença pulmonar em 11 casos, infecção disseminada num caso e derrame pericárdico também num caso. Em três casos foi identificado um M. marinum, isolado de lesões cutâneas. Nos outros dois pacientes foi identificado, respectivamente, um M. xenopi, responsável por derrame pleural, e um M. malmoense responsável por doença pulmonar. Ao longo do período de estudo observou-se um aumento no isolamento de MNT. Nos doentes com doença pulmonar provocada por MAC, 56% foram tratados com claritromicina associada a pelo menos mais dois antibióticos, principalmente rifampicina, etambutol e isoniazida. O doente infectado com M. malmoense foi sujeito ao mesmo tratamento. Os doentes com lesões cutâneas causadas por M. marinum foram tratados com claritromicina associada a ciprofloxacina ou doxiciclina. Pode-se concluir que o isolamento e a identificação molecular de micobactérias não tuberculosas são importantes para o estabelecimento do diagnóstico e consequente estratégia terapêutica, de forma mais rápida e adequada.

The nontuberculous mycobacteria (NTM) are ubiquitous agents of the environment. They can be found in natural waters, soil and animals, presenting variable pathogenicity. The NTM can be classified according to their rate of growth (slow growing or rapid growing) and colony pigment formation, or by their ability to cause disease in man. Potentially pathogenic NTM can cause a variety of diseases that differ in severity and importance. Generally disseminated diseases in patients with AIDS are associated with slow growing species and post-traumatic infections are associated with rapid growing species. There is a progressive increase in the importance of nontuberculous mycobacteria. Increasingly frequent isolation of different species of NTM, associated with the development of new laboratory techniques, originated an improvement in the diagnosis of infections caused by NTM. So it becomes crucial to assess how nontuberculous mycobacteria isolation contributes for establishing the disease diagnosis and for determining the therapeutic plan. The objective of this work was to assess the importance of molecular detection in nontuberculous mycobacteria identification in order to establish the diagnosis and therapeutic strategy on patients infected by NTM. In this study were used the MNT isolated in microbiology service of Coimbra University Hospitals, during the period 2006-2010. Positive samples for MNT are identified by two molecular methods, the Inno-lipa mycobacteria of Innogenetics and the system Accuprobe of Gen-Probe. In the study period were identified 433 strains of mycobacteria of which 108 were nontuberculous mycobacteria. Only 5% of samples with positive cultures for NTM had positive direct examination. The NTM were identified by two molecular methods, being the most frequent strains MAC, followed by M. fortuitum and M. chelonae. The NTM identified were considered to be causing disease in 25% of cases. MAC was the most frequent in cases of disease, causing pulmonary disease in 11 cases, disseminated infection in a case and pericardial effusion also in a case. In three cases it was identified a M. marinum strain, isolated from skin lesions. In the other two patients it was identified a M. xenopi, responsible for pleural effusion, and a M. malmoense, responsible for lung disease. In patients with pulmonary disease caused by MAC, 56% were treated with clarithromycin associated with at least two more antibiotics, especially rifampicin, ethambutol and isoniazid, and the same antibiotics were used for the patient infected with M. malmoense. Patients with skin lesions caused by M. marinum were treated with clarithromycin associated with ciprofloxacin or doxycycline. It can be concluded that the isolation and molecular identification of nontuberculous mycobacteria are important for establishing disease diagnosis and the consequent therapeutic strategy more quickly and appropriately.