Diagnóstico laboratorial de micoses humanas: métodos convencionais vs métodos moleculares

Abstract

O número de pessoas com sistema imunitário deficiente tem vido a aumentar, e poderá continuar a aumentar nas próximas décadas, devido a inúmeros factores, nomeadamente os avanços na medicina, que permitem manter os doentes em estado mais debilitados. Estes indivíduos constituem uma população cwn um grande risco & contrair infecções fúngicas oportunistas. Por outro lado, as viagens para regi& onde os fungos são endémim são cada vez mais frequentes, contribuindo também para esse aumento. Toma-se então, cada vez mais imprescindível, proceder & forma correcta ao exame micologico de qualquer material biológico, identificar a espécie responsável pela infecção e também, encontrar novos fármacos, cada vez mais eficazes na sua cura. Este trabalho teve como objectivo principal a aquisição de conhecimentos acerca das tknicas laboratoriais mais adequadas para um correcto diagnóstico rnicdógico de infec@es fúngicas humanas, bem como o conhecimento das caracteristicas que permitem a identificação de cada espécie de fungo. Para tal, ao longo de um ano, foram analisadas amostras provenientes de doentes com diagnóstico clínico de micose, tanto de micoses superficiais, como tamb&m de subcutâneas e sistemicas ou profundas. Relativamente as micoses oportunistas que actualmente são uma importante causa de doenga na população portuguesa, foi feito o diagnóstico laboratot-ial de um elevado número de casos de candidose e criptococose, usando métodos tradicionais e moleculares. Foram comparados os resultados obtidos pelos dois métodos, tendo-se concluido que os segundos são mais eficazes na correcta identificagão das espécies. Apresentaram no entanto algumas limitações, no que se refere ao material e equipamento de laboratório necessário. Para as espécies do genero Candida foi também efectuado um teste de sensibilidade aos antifungicos fluconazol e voriconazol, tendo-se verificado elevada sensibilidade para ambos os fármacos e também que a maioria dos içdados que demonstraram resistência ao fluconazol mostraram-se sensíveis ao voriconazol. Relativamente ao diagnóstico de micoses subcutâneas e sisternicas, foram acompanhados dois casos positivos, um referente a um indivíduo africano do sexo masculino que apresentava uma lesão na face, devida a Conidjobolus coronatvs e um outro de uma infecção por Aiternaia alternata, também num indivíduo do sexo masculino. Foram realizados dois estudos epidemiologicos. Num estudou-se a ocoriencia de tinhas do couro cabeludo numa creche e jardimde-infância do baim da Cova da Moura, na Amadora, Lisboa, tendese verificado que estas infecções ainda podem constituir um problema de saúde pública, pela sua elevada transmissibilidade. Estudou-se também um caso de uma criança de 4 anos imunocompetente com uma possível infecção por Ciyptocoocus neoformans proveniente de pombos do ambiente, tendo-se concluído, após pesquisa, que os pombos existentes no ambiente circundante da casa onde a criança residia não eram portadores deste microrganismo. Concluiu-se com este trabalho que, e frequentemente necessário que se passe a realizar o diagnóstico micológico de infecções humanas, pois muitas delas devem ser sub-diagnosticadas por falta de conhecimento adequado. Por último, apesar de a tendência global ser para o uso exclusivo de técnicas mdecutares no diagnóstico microbiológico, estas não deveao ser usadas isoladamente das técnicas tradicionais, mas sim como técnicas complementares de diagnóstico pois verificou-se que, onde falham umas, respondem as outras.

ABSTRACT: The nurnber of patients with an impaired immune system has increased, and may continue to increase in coming decades due to medicine advances. These individuais representa population with high nsk of opportunisüc fungal infections and it is likely that the number of infections will continue to increase over the next few years, since there are not vaccines yet, against these microorganisms. Furtherrnore, travels to regions where the fungí are endemic are increasingly frequent, also contributing to this increase. Therefore, it becomes essential to proceed to correct mycological examinatiori of any biological material, achieving identify the species responsible for the infection and also to find new dnigs, increasingly effective in curing these infections. This work aim was the acquisition of knowledge about the laboratory techniques used in the diagnosis of fungal infections in hurnan and the knowledge of the characteristics that allow the identification of each species of fungus. For that, over a year, have been analyzed samples from patients with clinical diagnosis of mywsis: superficial, subcutaneous and deep mycosis. For oppofiunistic mywses that currently are an important cause of disease in lhe Portuguese population, was made the laboratoiy diagnosis of a high nurnber of cases of candidose and criptomcose, using traditional and molecular methds. The results obtained by the Mo methods were compared and was concluded that the latter are more effective in the correct identification of species. They however show some limitations, with regard to material and laboratoiy equipment necessary. For species of the genus Candida was also camed out a test of sensitivity to anlfungal fluconazole and voriconazole and there have been high sensitivity to both drugs and also the majority of the isolates resistant to fluconazole, proved susceptible to voriconazole, For the diagnosis of systemic and subcutaneous mycoses were accompanierl two positive cases, one for an individual African male who had an injury on the face, due to Connidiobolus coronatus and another of an infection with Alternana alternata, also in a male. Two epiderniological studies were conducted. One to study the occurrence of tinea capitis in a nursery and kidgardener of the Bairro da Cova da Moura, in Amadora, Lisbon, and there have been demonstrated that these infections can still be a public health problem, with a great transmissibility. It was alço conducted a case of an imrnunocompetent 4 years old child possibly by Cryptococcus neoformans from pigeons of the environment, and was concluded, after research, that the existing pigeons on the roof and near ihe building where the child resided were not carriers of this microorganisrn. It is concluded from this work that, although the overall trend is for the exclusive use of molecular techniques in the microbiological diagnosis, they should not be used alone frorn traditional techniques, but as cornplementary techniques of diagnosis because it was found that, where fail one, the other work.