Chemical modification of human proteins for the development of personalized cell culture and bioinks

Abstract

Tissue engineering (TE) aims to repair or regenerate tissues by combining knowledge from several research fields with advanced technologies like three-dimensional (3D) bioprinting. To overcome the cellular monolayer limitations, advances in protein-based bioinks are being developed. Proteins are one of the most promising biomaterials due to their biocompatibility, unique structure, complexity, abundance, and variety. Their structures make proteins prestigious chemical targets for modification, assisting in developing currently used bioinks. Envisioning to development of physiologically enhanced 3D cell culture platforms, this work presents chemically engineered human platelet lysates to develop a personalised bioink. The PL-DBCO-MA bioink was formed through two main reactions: the Strain-promoted azide-alkyne cycloaddition (SPAAC) reaction between the dibenzocyclooctyne (DBCO) and the azide-bearing Poly(ethylene glycol) methyl ether (PEG), and the photopolymerization between the methacrylic anhydride (MA) groups. Due to these two crosslinks, it was possible to have a system that gained viscosity and suitable characteristics for extrusion printing, and then the final construct was fixated by blue light. Mechanical and rheological assays proved the tunable characteristics for bioprinting and cell support. Human adipose stem cells (hASCs) encapsulation showed good biocompatibility and cell support of the biomaterial. Our findings represent the first successful development of a 3D printable human platelet lysates (hPL)-based bioink with no supporting bath.

A engenharia de tecidos visa reparar ou regenerar tecidos combinando conhecimentos de diversas áreas de pesquisa com tecnologias avançadas como a bioimpressão tridimensional. Para superar as limitações da monocamada celular, avanços em biotintas à base de proteínas estão sendo desenvolvidos. As proteínas são os biomateriais mais promissores devido à sua biocompatibilidade, estrutura única, complexidade, abundância e variedade. As suas estruturas tornam as proteínas alvos químicos de grande prestígio para modificação, auxiliando no desenvolvimento das biotintas utilizadas atualmente. Visando o desenvolvimento de plataformas de cultura de células 3D fisiologicamente aprimoradas, este trabalho apresenta lisados de plaquetas humanos quimicamente modificados para desenvolver uma biotinta personalizada. A biotinta PL-DBCO-MA foi formada através de duas reações principais: a reação strain-promoted azide-alkyne cycloaddition (SPAAC) entre a dibenzociclooctina (DBCO) e o éter metílico de poli(etilenoglicol) (PEG) contendo azida, e a fotopolimerização entre os grupos metacrilico anidrido (MA). Devido a essas duas ligações cruzadas, foi possível ter um sistema que ganhou viscosidade e características adequadas para impressão por extrusão, e então a construção final foi fixada por luz azul. Ensaios mecânicos e reológicos comprovaram as características ajustáveis para bioimpressão e suporte celular. O encapsulamento das hASCs mostrou boa biocompatibilidade e suporte celular do biomaterial. Nossas descobertas representam o primeiro desenvolvimento bem-sucedido de uma biotinta baseada em plaquetas de lisados humanos (hPL) imprimível em 3D sem banho de suporte.