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dc.contributor.advisorVasconcelos, M. Helenapt_PT
dc.contributor.advisorXavier, Cristinapt_PT
dc.contributor.advisorHenriques, Ana Gabriela da Silva Cavaleiropt_PT
dc.contributor.authorSoure, Inês Adriana Mirandapt_PT
dc.date.accessioned2022-11-04T16:29:07Z-
dc.date.issued2022-07-28-
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/10773/35132-
dc.description.abstractExtracellular vesicles (EVs) are nanosized particles that are secreted by almost all cell types within the body. EVs carry complex molecular cargos, such as proteins, nucleic acids and lipids, which can be delivered to recipient cells, thus mediating intercellular signaling and communication between cells. Importantly, the cargo of EVs derives from their cells of origin. Evidence from several studies highlights the role of tumor-derived EVs in promoting tumorigenesis, as well as contributing to drug resistance in both solid tumors and hematological malignancies. Moreover, EVs have gained great prominence as a novel source of biomarkers in liquid biopsies. Acute myeloid leukemia (AML) is a life-threatening disorder of the blood and bone marrow, that progresses rapidly. EVs have been demonstrated to play an important role in the pathogenesis of AML and they have the potential to be used as a source of biomarkers for the early detection of AML, for monitoring measurable residual disease (MRD) and for detecting the appearance of drug resistance. The main aim of this dissertation was to contribute to the identification of possible AML biomarkers present in EVs released by AML cell lines. EVs released by two leukemic cell lines, OCI-AML3 and KG1a, were isolated through differential ultracentrifugation and were characterized in terms of particle morphology, size and concentration by transmission electron microscopy (TEM) and nanoparticle tracking analysis (NTA). Mass spectrometry (MS)-based proteomic analysis was performed and several known EV markers were identified in the EVs released by both cell lines. For instance, heat shock protein HSP 90-beta and α-actinin 4 (accepted EV markers) were detected in EVs shed by the KG1a cell line. The expression of α-actinin 4, CD81 and syntenin-1 (accepted EV markers) in EVs shed by the OCI-AML3 cell line was confirmed by Western Blot. The proteomic analysis also identified some clinically established AML immunophenotypic protein markers (LAIPs) in the isolated EVs, namely CD14 and CD33 in the EVs released by the OCI-AML3 cell line, and CD7 and CD34 in EVs released by the KG1a cell line. The presence of CD14 and CD33 was then confirmed in OCI-AML3-derived EVs, by Western Blot analysis. In addition, proteomic results demonstrated that moesin, α-2-macroglobulin, filamin-a and non-POU domain containing octamer-binding protein were highly abundant in EVs released by the OCI-AML3 cell line and that moesin, α-enolase and cofilin-1 were highly abundant in EVs released by the KG1a cell line. According to the literature, all of these proteins have been previously associated with tumorigenesis and/or drug resistance, thus having potential as candidate biomarkers of AML. Importantly, moesin, α-enolase and filamin-a were simultaneously highly abundant in EVs released by both cell lines, suggesting their potential as MRD AML biomarkers. This hypothesis will need to be confirmed in future studies, extending this analysis to other AML cell lines and to non-tumor cell lines as controls. Further studies are also needed to confirm the preliminary results obtained regarding the proteomic analysis of the KG1a cell line and EVs. Ultimately, this work might contribute to a better understanding of the potential of EVs as sources of biomarkers in AML.pt_PT
dc.description.abstractAs vesículas extracelulares (EVs) são nanopartículas libertadas por praticamente todos os tipos de células do corpo. As EVs transportam cargos moleculares complexos, tais como proteínas, lípidos e ácidos nucleicos, que podem ser entregues a células recetoras, mediando assim a sinalização e comunicação intercelular. Notavelmente, os cargos das EVs advêm das suas células de origem. Evidências de diversos estudos realçam o papel das EVs derivadas de tumores na promoção da tumorigénese, bem como na contribuição para a resistência a fármacos, tanto em tumores sólidos como em doenças hematológicas. Adicionalmente, as EVs ganharam grande proeminência como uma nova fonte de biomarcadores em biópsias líquidas. A leucemia mielóide aguda (AML) é uma desordem letal do sangue e medula óssea, que progride rapidamente. Foi demonstrado que as EVs apresentam um papel importante na patogenicidade da AML e que têm potencial para ser fontes de biomarcadores para detetar a AML precocemente, para monitorizar a doença residual mensurável (MRD) e para detetar o aparecimento de resistência a fármacos. O objetivo principal desta dissertação foi contribuir para a identificação de possíveis biomarcadores de AML nas EVs libertadas por linhas celulares de AML. As EVs libertadas por duas linhas celulares leucémicas, OCI-AML3 e KG1a, foram isoladas por ultracentrifugação diferencial e foram caracterizadas em termos da morfologia, tamanho e concentração das partículas por microscopia eletrónica de transmissão (TEM) e análise de rastreamento de nanopartículas (NTA). Foi realizada uma análise proteómica baseada em espetrometria de massa (MS) e diversos marcadores de EVs conhecidos foram identificados nas EVs libertadas por ambas as linhas celulares. Por exemplo, a proteína de choque térmico HSP 90-beta e a α-actinina 4 (marcadores aceites de EVs) foram detetados nas EVs libertadas pela linha celular KG1a. A expressão de α-actinina 4, CD81 e sintenina-1 (marcadores aceites de EVs) nas EVs libertadas pela linha celular OCI-AML3 foi confirmada por “Western blot”. A análise proteómica também identificou nas EVs isoladas alguns marcadores proteicos imunofenotípicos de AML clinicamente estabelecidos (LAIPs), nomeadamente o CD14 e CD33 nas EVs libertadas pela linha celular OCI-AML3, e o CD7 e CD34 nas EVs libertadas pela linha celular KG1a. A presença de CD14 e CD33 nas EVs derivadas da linha celular OCI-AML3 foi depois confirmada por “Western Blot”. Para além disso, os resultados da proteómica demonstraram que as proteínas moesina, α-2-macroglobulina, filamina-a e a proteína de ligação ao octâmero que não contém domínio POU, apareceram com elevada abundância nas EVs libertadas pela linha celular OCI-AML3 e que a moesina, α-enolase e cofilina-1 apareceram com elevada abundância nas EVs libertadas pela linha celular KG1a. Segundo a literatura, todas estas proteínas foram previamente associadas com tumorigénese e/ou resistência a fármacos, podendo ter potencial como candidatos a biomarcadores de AML. Notavelmente, a moesina, a α-enolase, e a filamina-a foram identificadas como tendo simultaneamente elevada abundância nas EVs libertadas por ambas as linhas celulares, o que sugere o seu potencial como biomarcadores de MRD na AML. Esta hipótese terá de ser confirmada em estudos futuros, estendendo esta análise a outras linhas celulares de AML e a linhas celulares não tumorais como controlos. São também necessários mais estudos para confirmar os resultados preliminares obtidos no que diz respeito à análise proteómica da linha celular KG1a e EVs. Em última análise, este trabalho talvez possa contribuir para uma melhor compreensão sobre o potencial das EVs como fontes de biomarcadores na AML.pt_PT
dc.language.isoengpt_PT
dc.relationPOCI-01-0145-FEDER-030457pt_PT
dc.rightsembargoedAccesspt_PT
dc.rights.urihttps://creativecommons.org/licenses/by/4.0/pt_PT
dc.subjectExtracellular vesiclespt_PT
dc.subjectMethods of characterization of extracellular vesiclespt_PT
dc.subjectProtein cargo of extracellular vesiclespt_PT
dc.subjectLeukemia cell linespt_PT
dc.subjectDisease biomarkerspt_PT
dc.titleStudy of the protein cargo of extracellular vesicles released by Acute Myeloid Leukemia cell linespt_PT
dc.title.alternativeEstudo do cargo proteico de vesículas extracelulares libertadas por linhas celulares de Leucemia Mielóide Agudapt_PT
dc.typemasterThesispt_PT
thesis.degree.grantorUniversidade de Aveiropt_PT
dc.date.embargo2024-08-30-
dc.description.masterMestrado em Bioquímicapt_PT
Appears in Collections:UA - Dissertações de mestrado
DQ - Dissertações de mestrado

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