Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10773/31922
Title: Monitoring of Toxoplasma gondii and Cyclospora cayetanensis in the environment
Other Titles: Monitorização de Toxoplasma gondii e Cyclospora cayetanensis no ambiente
Author: Relvas, Fabiana Sousa
Advisor: Mendo, Sónia
Costa, José Manuel Correia da
Keywords: Foodborne and waterborne diseases
Cyclospora cayetanensis
Toxoplasma gondii
Microscopy
PCR
Sequencing
Defense Date: 21-Jun-2021
Abstract: Toxoplasma gondii and Cyclospora cayetanensis are protozoa, of worldwide distribution, capable of infecting humans. Transmission of these protozoa generally occurs via the oral-fecal route, with foods consumed raw and contaminated water , consensually assumed as sources of contamination. The aim of this study was the detection and characterization of Toxoplasma gondii and Cyclospora cayetanensis in fresh vegetables and water in order to assess the possible risk to consumer food safety. Twenty-five samples were collected from an agriculture exploration, more specifically, 13 samples of water and 12 samples of vegetables. The potential oocysts of Toxoplasma gondii and Cyclospora cayetanensis were concentrated by applying high resolution water filtration and immunomagnetic separation (Method 1623.1, EPA, 2012) in order to remove oocysts of Cryptosporidium spp. and cysts of Giardia spp. and recover the parasites of interest: Toxoplasma gondii and Cyclospora cayetanensis. The detection of Toxoplasma gondii and Cyclospora cayetanensis was performed by conventional PCR, using specific primers for a 183 bp sequence of the 529 bp repetitive region of T. gondii; and for a 116 bp sequence of the ITS2 region and a 298 bp sequence for 18S rRNA gene of C. cayetanensis. All PCR-positive DNA samples were purified and sequenced. In addition, the presence of the parasite was observed by fluorescence microscopy, taking advantage of the autofluorescence of the oocysts under ultraviolet light, as well as staining techniques. None of the samples showed to be contaminated with T. gondii, however, 28% of the samples showed positive results for C. cayetanensis when the PCR technique was performed. These fragments were confirmed by sequencing. Moreover, microscopic autofluorescence and staining techniques supported the presence of structures compatible with C. cayetanensis oocysts. The results obtained provide relevant evidence of contamination of fresh vegetables and water with C. cayetanensis oocysts.
Toxoplasma gondii e Cyclospora cayetanensis são protozoários, de distribuição mundial, com capacidade de infetarem o Homem. A transmissão destes protozoários ocorre, geralmente, por via oral-fecal, sendo os alimentos de origem vegetal consumidos crus e a água contaminada, assumidos, consensualmente, como fontes de contágio. O objetivo deste estudo foi a deteção e caracterização de Toxoplasma gondii e Cyclospora cayetanensis em vegetais e água, com o intuito de avaliar o possível risco para a segurança alimentar do consumidor. Foram recolhidas 25 amostras de uma exploração agrícola, mais especificamente, 13 amostras de água e 12 amostras de vegetais. Os potenciais oocistos de Toxoplasma gondii e Cyclospora cayetanensis foram concentrados através da filtração de água de alta resolução e por separação imunomagnética (Método 1623.1, EPA, 2012), com o intuito de remover oocistos de Cryptosporidium spp. e cistos de Giardia spp. e recuperar os parasitas de interesse: Toxoplasma gondii e Cyclospora cayetanensis. A deteção de Toxoplasma gondii e de Cyclospora cayetanensis foi realizada através de PCR convencional, utilizando primers específicos para uma sequência de 183 pb da região repetitiva de 529 pb de T. gondii; e para uma sequência de 116 pb da região ITS2 e uma sequência de 298 pb do gene 18S rRNA de C. cayetanensis. Todas as amostras de ADN positivas para PCR foram purificadas e sequenciadas. Além disso, a presença do parasita foi observada por microscopia de fluorescência, aproveitando a autofluorescência dos oocistos sob luz ultravioleta, assim como também foram utilizadas técnicas de coloração. Nenhuma das amostras mostrou estar contaminada com T. gondii, no entanto, 28% das amostras apresentaram resultados positivos para C. cayetanensis quando realizada a técnica de PCR. Esses fragmentos foram confirmados por sequenciação. Além disso, a microscopia de fluorescência e técnicas de coloração confirmaram a presença de estruturas compatíveis com oocistos de C. cayetanensis. Os resultados obtidos fornecem evidências relevantes de contaminação de vegetais frescos e água com oocistos de C. cayetanensis.
URI: http://hdl.handle.net/10773/31922
Appears in Collections:UA - Dissertações de mestrado
DBio - Dissertações de mestrado

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
Documento_Fabiana_Relvas.pdf2.27 MBAdobe PDFView/Open


FacebookTwitterLinkedIn
Formato BibTex MendeleyEndnote Degois 

Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.