Abordagem ao diagnóstico bioquímico e molecular de doenças hereditárias do metabolismo

Abstract

As doenças hereditárias do metabolismo DHM representam coletivamente um dos grupos mais comuns de doenças mendelianas, porque apesar de individualmente raras a sua prevalência coletiva é de cerca de 1 em 1000 nados vivos. Quando existe algum sinal ou característica clínica sugestivas de uma determinada DHM é possível efetuar a investigação metabólica apropriada para o estabelecimento do diagnóstico analítico. A confirmação molecular do diagnostico é feita por sequenciação dirigida, tendo em vista a oferta de aconselhamento genético, diagnóstico pré-natal e seleção de abordagens terapêuticas às famílias afetadas. Este trabalho teve por objetivo o desenvolvimento de procedimentos analíticos conducentes ao diagnostico de DHM. Para o diagnostico de aminoacidopatias efetuou-se a quantificação de aminoácidos livres no plasma por cromatografia de troca iónica. Para o diagnóstico de défices congénitos da glicosilação efetuou-se a analise das isoformas de transferrina por focagem isoelétrica. Finalmente, sendo a sequenciação génica uma metodologia essencial num laboratório dedicado ao diagnóstico de doenças genéticas, este trabalho teve também por objetivo o esclarecimento da etiologia molecular bem como o alargamento do espectro mutacional de DHM do grupo dos diabetes tipo MODY e das peroxissomais.

Inherited metabolic disorders IMD collectively represent one of the most common groups of Mendelian diseases, because despite being individually rare their collective prevalence is about 1 in 1000 live births. If there is any specific clinical or feature to suggest a particular inherited metabolic disease, appropriate metabolic investigations can be performed to support the diagnosis. The molecular confirmation of the diagnosis is made by targeted sequencing, with a view to offering genetic counseling, prenatal diagnosis and selection of therapeutic approaches to affected families. This work aimed to develop analytical procedures leading to the diagnosis of DHM. For the diagnosis of amino acid diseases, the quantification of free amino acids in plasma was carried out by ion exchange chromatography. For the diagnosis of congenital glycosylation deficits, transferrin isoforms were analyzed by isoelectric focusing. Finally, since gene sequencing is an essential methodology in a laboratory dedicated to the diagnosis of genetic diseases, this work also aimed at clarifying the molecular etiology as well as widening the mutational spectrum of DHM in the group of MODY and peroxisomal ones.