Utilize este identificador para referenciar este registo:
http://hdl.handle.net/10773/30141
Título: | Production and purification of anti-human interleukin- 8 monoclonal antibodies |
Outros títulos: | Produção e purificação de anticorpos monoclonais humanos anti-interleucina-8 |
Autor: | Bairos, Jéssica Chaves Braga |
Orientador: | Martins, Guadalupe Freire Tavares, Ana Paula Mora |
Palavras-chave: | Monoclonal antibodies Immunoglobulin G Anti-interleukin-8 Downstream processing Supported ionic liquid phase materials |
Data de Defesa: | Dez-2019 |
Resumo: | Over the past few years, monoclonal antibodies (mAbs) have gained interest as
alternative therapy. In particular, anti-interleukin-8 (anti-IL-8) mAbs have shown
high potential for the treatment of inflammatory diseases, since they reduce
neutrophil infiltration in the early stage of inflammation. However downstream
processing has not evolved at the same rate as upstream, being considered the
limiting and most costly step in the production of these biopharmaceuticals. The
conventional platform adopted for the purification of IgG, counts on a primary
antibody capture step by protein A affinity chromatography. This technique is
extremely costly - with two chromatographic purification steps. Nevertheless, the
high costs and intrinsic limitations on the use of the ligand itself are other
disadvantages of using protein A affinity chromatography. In order to develop an
alternative process based on the use of ionic liquids (ILs) as chemical ligands,
this dissertation investigated three supported ionic liquid phase materials
([Si][C3C1im]Cl, [Si][N3444]Cl and [Si][N3888]Cl) as alternative matrices for the
extraction and/ or purification of antibodies, namely IgG from complex biological
matrices (human serum, rabbit serum and Chinese hamster ovary cell culture
supernatants). Initially, the operating conditions of the process were optimized,
namely the solid: liquid ratio (S:L ratio), pH and contact time (t), in order to
maximize the process performance parameters. Best results were obtained
using [Si][C3C1im]Cl (S:L ratio= 150 mg.mL-1
; pH 12; t= 60 min) and [Si][N3888]Cl
(S:L ratio= 100 mg.mL-1
; pH 11; t= 60 min), where it was possible to obtain 59%
and 76% IgG yields with 84% and 100% purity levels respectively. Moreover, the
IgG purification mechanism was found to be highly dependent on the supported
IL structure, being flowthrough-like mode using [Si][C3C1im]Cl and bin-and-elutelike mode with [Si][N3888]Cl. Thus, two new, more efficient and economical
strategies for downstream antibody processing have been developed,
representing important advances in the biopharmaceutical field. Ao longo dos últimos anos, os anticorpos monoclonais (mAbs) têm vindo a ganhar interesse crescente como terapia alternativa. Em particular, os mAbs anti-interleucina-8 (anti-IL-8) têm apresentado elevado potencial para o tratamento de doenças inflamatórias, uma vez que reduzem a infiltração de neutrófilos no estágio inicial da inflamação. Contudo o processamento a jusante não evoluiu ao mesmo ritmo que o processamento a montante, sendo considerado atualmente como a etapa limitante e dispendiosa na produção destes biofármacos. A plataforma convencional adotada para a purificação de IgG conta com uma etapa primária de captura do anticorpo através da cromatografia de afinidade com a proteína A. Esta técnica é extremamente dispendiosa –,onde apresenta duas etapas cromatográficas de purificação. No entanto, os elevados custos e as limitações intrínsecas ao uso do próprio ligando são outras desvantagens da utilização de cromatografia de afinidade com proteína A. Com vista ao desenvolvimento de um processo alternativo baseado na utilização de líquidos iónicos (LIs) como ligandos químicos, nesta tese de mestrado procedeu-se à investigação de três materiais com líquidos iónicos suportados ([Si][C3C1im]Cl, [Si][N3444]Cl, [Si][N3888]Cl) como matrizes alternativas para a extração e/ou purificação de anticorpos, nomeadamente a IgG de matrizes biológicas complexas (soro humano, soro de coelho e sobrenadantes de culturas celulares de ovário de hamster chinês). Inicialmente, foram otimizadas as condições operacionais do processo, nomeadamente a razão sólido:líquido (razão S:L), p e tempo de contacto (t) de forma a maximizar os parâmetros de performance do processo. Os melhores resultados foram obtidos utilizando [Si][C3C1im]Cl (razão S:L = 150 mg.mL-1 ; pH 12; t = 60 min) e [Si][N3888]Cl (razão S:L = 100 mg.mL-1 ; pH 11; t = 60 min) em que foi possível obter rendimentos de IgG de 59% e 76% com níveis de pureza de 84% e 100%, respetivamente. Mais ainda, verificou-se que o mecanismo de purificação de IgG é altamente dependente da estrutura do LI suportado, sendo “flowthrough-like mode” utilizando [Si][C3C1im]Cl e “bin-and-elute-like mode” com [Si][N3888]Cl. Assim, duas novas estratégias mais eficientes e económicas para o processamento a jusante de anticorpos foram desenvolvidas, representando importantes avanços na área biofarmacêutica. |
URI: | http://hdl.handle.net/10773/30141 |
Aparece nas coleções: | UA - Dissertações de mestrado DQ - Dissertações de mestrado |
Ficheiros deste registo:
Ficheiro | Descrição | Tamanho | Formato | |
---|---|---|---|---|
Documento_Jéssica_Bairos.pdf | 10.45 MB | Adobe PDF | Ver/Abrir |
Todos os registos no repositório estão protegidos por leis de copyright, com todos os direitos reservados.