Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10773/28032
Title: Photoinactivation of MRSA on skin: effect of potassium iodide and iodopovidone as potentiators of a porphyrinic formulation
Author: Braz, Márcia Alexandra Dias
Advisor: Gomes, Ana Teresa Peixoto de Campos
Almeida, Adelaide de
Keywords: Antimicrobial photodynamic therapy
Porphyrinic formulation
Potentiators agents
Potassium iodide
Iodopovidone
Methicillin-resistant Staphylococcus aureus
Skin
Defense Date: 17-Dec-2019
Abstract: Staphylococcus aureus, Gram-positive bacterium, is one of the leading causes of a wide range of serious clinical infections, such as skin and soft tissue infections. To treat these infections, antibiotics are used as the first treatment option. However, S. aureus, namely methicillin-resistant S. aureus (MRSA), can acquire resistance to the conventionally used antibiotics. This fact is associated with high mortality, morbidity and high financial costs associated with the treatment. Therefore, new approaches for the control of infections by this bacterium are needed. Antimicrobial photodynamic therapy (aPDT), a multitarget therapy, has emerged as a promising alternative treatment for localized infections in response to the growing problem of antibiotic resistance. This therapy requires the use of three key elements: photosensitizer (PS), light (usually in the visible range) and oxygen. In the presence of these elements reactive oxygen species (ROS) responsible for oxidative damage and microbial cell death, are generated. Despite several in vitro studies reporting the effectiveness of this therapy in inactivating a broad spectrum of microorganisms, including S. aureus, there are few in vivo and ex vivo studies. In this sense and given the importance of the composition of test matrices in aPDT, in order to transpose this therapy for clinical application, it is necessary to test the PSs in clinically relevant matrices. Thus, the aim of this work was to evaluate the effectiveness of various aPDT approaches to control S. aureus infections on skin. The use of aPDT adjuvants is important in order to increase the efficiency of aPDT, reducing at the same time the amount of PS and/or the treatment time and therefore the costs involved. In this work, a porphyrin formulation (FORM), based on a non-separated mixture of 5 cationic porphyrins and with recognized efficiency as an alternative to the highly efficient PSs included in the formulation was used, in order to reduce the costs and synthesis time relatively to the use of the separated porphyrins. FORM has already been shown to be effective in aPDT of various bacteria, including S. aureus. Potassium iodide (KI), recognized for increasing the efficiency of some PSs in a broad spectrum of microorganisms, including S. aureus, through the formed iodine species, was also used as a potentiator of aPDT. Iodopovidone (PVP-I), a commonly used antimicrobial agent as disinfectant and antiseptic, being a water-soluble complex of iodine bound to polyvinylpyrrolidone, was also tested as a potentiator of aPDT. In a first phase, the aPDT protocol was developed in phosphate buffered saline (PBS, in vitro). Thereafter, the efficacy of FORM, as PS, alone and in combination with KI or PVP-I to photoinactivate MRSA on skin was evaluated. For this, porcine skin (considered a good test model for human skin) was artificially contaminated with MRSA and treated with FORM, FORM + KI or FORM + PVP-I, under white light. The results showed that FORM was effective to inactivate MRSA in PBS, where total inactivation was achieved for all tested concentrations (0.5, 1.0 and 5.0 μM). For the combinations FORM + KI and FORM + PVP-I, total inactivation of MRSA and considerable reduction in irradiation time compared to FORM alone was observed using the lowest tested PS concentration (0.5 μM). On skin, ex vivo, a reduction in MRSA survival of 3.1 Log10 colony forming units (CFU) mL-1 with 50 μM FORM, was observed. Although the FORM + KI and FORM + PVP-I combinations enhanced the efficacy of aPDT in inactivating MRSA in PBS, this effect was not observed in ex vivo assays. Overall, aPDT using FORM as PS, even without adjuvants, is a promising therapy for the inactivation of MRSA on skin.
Staphylococcus aureus é uma bactéria de Gram-positivo que pode causar vários tipos de infeções, incluindo doenças graves, como infeções de pele e tecidos moles. Os antibióticos são usados como primeira opção no tratamento destas infeções. Algumas estirpes de S. aureus, nomeadamente S. aureus resistente à meticilina (MRSA), podem adquirir resistência aos antibióticos mais frequentemente utilizados. Tal facto está associado a alta mortalidade, morbidade e altos custos financeiros associados ao seu tratamento. Assim, é necessário desenvolver novas abordagens para controlar infeções causadas por esta bactéria. A terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT), uma terapia multi-alvo, surgiu como um tratamento alternativo promissor para infeções localizadas em resposta ao crescente problema da resistência aos antibióticos. Esta terapia requer o uso de três elementos-chave: fotossensibilizador (PS), luz (geralmente na gama do visível) e oxigénio. Na presença destes elementos, são geradas espécies reativas de oxigénio (ROS) que causam danos oxidativos nos microrganismos e consequentemente a sua morte. Apesar dos vários estudos in vitro que relatam a eficácia desta terapia na inativação de um amplo espectro de microrganismos, incluindo S. aureus, poucos são os estudos in vivo e ex vivo. Neste sentido, e dada a importância da composição das matrizes teste em aPDT, com vista à transposição desta terapia para aplicação clínica, é necessário testar os PSs em matrizes clinicamente relevantes. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia de vários protocolos de aPDT no controlo de infeções causadas por S. aureus na pele. De forma a aumentar a eficácia da aPDT, o uso de adjuvantes pode ser usado reduzindo também a quantidade de PS e/ou o tempo de tratamento e, portanto, os custos envolvidos no tratamento. Neste trabalho foi usada uma formulação porfirínica (FORM), baseada numa mistura não separada de 5 porfirinas catiónicas e reconhecida como uma alternativa ao uso dos PSs individuais incluídos nesta mistura, permitindo reduzir os custos e o tempo de síntese relativamente ao uso de porfirinas separadas. A FORM já mostrou ser eficaz na aPDT de várias bactérias, incluindo S. aureus. O iodeto de potássio (KI), reconhecido por aumentar a eficiência de alguns PSs para um amplo espectro de microorganismos, incluindo S. aureus, através da formação de espécies de iodo foi usado como potenciador da aPDT. A iodopovidona (PVPI), agente antimicrobiano vulgarmente usado como desinfetante e antisséptico, sendo um complexo solúvel em água de iodo ligado à polivinilpirrolidona, foi também testado como potenciador da aPDT. Numa primeira fase, o protocolo de aPDT foi desenvolvido em solução salina tamponada com fosfato (PBS, in vitro). Posteriormente, foi avaliada a eficácia da FORM, como PS, sozinha e em combinação com KI ou PVP-I para fotoinativar MRSA na pele. Para isso, pele suína (considerada um bom modelo de teste para a pele humana) foi artificialmente contaminada com MRSA e tratada com FORM, FORM + KI ou FORM + PVP-I, sob luz branca. Os resultados mostraram que a FORM foi eficaz para inativar MRSA em PBS, tendo sido observada inativação total para todas as concentrações testadas (0,5; 1,0 e 5,0 μM). Para as combinações FORM + KI e FORM + PVP-I, foi observada inativação total de MRSA e considerável redução no tempo de irradiação em comparação com a FORM sozinha, para a menor concentração de PS testada (0,5 μM). Na pele, ex vivo, foi observada uma redução na sobrevivência de MRSA de 3.1 Log10 unidades formadoras de colónias (UFC) mL-1 com 50 μM de FORM. Embora as combinações FORM + KI e FORM + PVP-I aumentassem a eficácia da aPDT na inativação de MRSA em PBS, esse efeito não foi observado nos ensaios ex vivo. No geral, a aPDT usando a FORM como PS, mesmo sem adjuvantes, é uma terapia promissora para a inativação de MRSA na pele.
URI: http://hdl.handle.net/10773/28032
Appears in Collections:UA - Dissertações de mestrado
DBio - Dissertações de mestrado

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
documento.pdf1.73 MBAdobe PDFembargoedAccess


FacebookTwitterLinkedIn
Formato BibTex MendeleyEndnote Degois 

Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.