Caracterização molecular da resistência aos antibióticos em estirpes hospitalares de Klebsiella pneumoniae

Abstract

A espécie Klebsiella pneumoniae é largamente reconhecida como patogénico oportunista em doentes hospitalares. Em Portugal, os actuais níveis de resistência a antibióticos, entre eles ao ?-lactâmico ceftazidima, são particularmente preocupantes. A resistência a oxiimino-? -lactâmicos é devida, principalmente, à produção de ? -lactamases de espectro alargado. Neste trabalho estudaram-se 49 isolados nosocomiais de K. pneumoniae resistentes à ceftazidima, obtidos pelo laboratório de Microbiologia do Hospital de Santa Maria. A caracterização molecular da resistência aos ?-lactâmicos permitiu a identificação das ?-lactamases de espectro alargado GES-1 e TEM-10, assim como de um integrão de classe 3, identificado pela primeira vez em isolados clínicos na Europa e o segundo a ser caracterizado. O integrão In3-p22K9 de K. pneumoniae FFUL 22K localizava-se num plasmídeo de 9,4 Kb e continha uma gene cassette blaGES-1 e uma cassette fundida blaOXA-10-tipo/aac(6’)-Ib. Anteriormente, as gene cassettes blaGES-1 apenas tinham sidos encontradas em integrões de classe 1, os mais comummente descritos de isolados clínicos de Enterobacteriaceae resistentes a antibióticos. A análise da segunda gene cassette revelou tratar-se de uma nova cassette fundida que codificava uma enzima AAC(6’)-Ib resultando da fusão traducional entre uma gene cassette do tipo blaOXA-10 e outra do tipo aac(6’) -Ib. A ?-lactamase TEM-10 foi identificada em três isolados representativos de um grupo constituído por 19 isolados. O gene blaTEM-10 localizava-se num plasmídeo conjugativo, com cerca de 50 Kb. A mesma enzima, associada a um plasmídeo com o mesmo tamanho, havia previamente sido encontrada em estirpes de K. pneumoniae isoladas no mesmo hospital entre 1991 e 1997. A permanência, ao longo de dez anos, de um plasmídeo contendo o gene blaTEM-10 no ambiente do Hospital de Santa Maria configura uma situação de endemia, quer do plasmídeo quer da enzima TEM-10.

Klebsiella pneumoniae is well known as an opportunistic pathogen in hospital patients. In Portugal, the present levels of antibiotic resistance, namely to ceftazidime, are alarming. Resistance to oxyimino-? -lactams is mainly due to the production of extended-spectrum ? -lactamases. In the present work, 49 K. pneumoniae nosocomial isolates resistant to ceftazidime from Hospital de Santa Maria were studied. Molecular characterisation of ?-lactam resistance allowed for the identification of the extended-spectrum ? -lactamases GES-1 and TEM-10 and of a class 3 integron, identified for the first time from European clinical isolates and the second that was characterised. The integron In3-p22K9 from K. pneumoniae FFUL 22K was located on a 9.4-kb plasmid and contained a blaGES-1 gene cassette and a fused blaOXA-10-type/aac(6’)-Ib gene cassette. Previously, the blaGES-1 gene cassettes have only been described from class 1 integrons, the most commonly found in antibiotic resistant Enterobacteriaceae clinical isolates. The analysis of the second cassette revealed that it was a new fused cassette that encoded an AAC(6’)-Ib enzyme resulting from the translational fusion of blaOXA-10-type and aac(6’)-Ib gene cassettes. TEM-10 ?-lactamase was identified from three isolates, representing a cluster of 19 isolates. The blaTEM-10 gene was located on a 50-kb conjugative plasmid. The same enzyme, associated with a plasmid with the same size, was previously found in K. pneumoniae strains isolated from the same hospital between 1991 and 1997. The 10-year-long stability of a blaTEM-10-containing plasmid in the Hospital de Santa Maria environment suggests that both the plasmid and the ?-lactamase TEM-10 are endemic.