Development and characterization of Poly(L-lactic acid) (PLLA) platforms for bone tissue engineering

Abstract

The development of scaffolds based on biomaterials is a promising strategy for Tissue Engineering and cellular regeneration. This work focuses on Bone Tissue Engineering, the aim is to develop electrically tailored biomaterials with different crystalline and electric features, and study their impacts onto cell biological behavior, so as to predict the materials output in the enhancement of bone tissue regeneration. It is accepted that bone exhibits piezoelectricity, a property that has been proved to be involved in bone growth/repair mechanism regulation. In addition electrical stimulations have been proved to influence bone growth and repair. Piezoelectric materials are therefore widely investigated for a potential use in bone tissue engineering. The main goal is the development of novel strategies to produce and employ piezoelectric biomaterials, with detailed knowledge of mechanisms involved in cell-material interaction. In the current work, poly (L-lactic) acid (PLLA), a synthetic semi-crystalline polymer, exhibiting biodegradibility, biocompatibility and piezoelectricity is studied and proposed as a promoter of enhanced tissue regeneration. PLLA has already been approved for implantation in human body by the Food and Drug Administration (FDA), and at the moment it is being used in several clinical strategies. The present study consists of first preparing films with different degrees of crystallinity and characterizing these PLLA films, in terms of surface and structural properties, and subsequently assessing the behavior of cells in terms of viability, proliferation, morphology and mineralization for each PLLA configuration. PLLA films were prepared using the solvent cast technique and submitted to different thermal treatments in order to obtain different degrees of crystallinity. Those platforms were then electrically poled, positively and negatively, by corona discharge in order to tailor their electrical properties. The cellular assays were conducted by using two different osteoblast cell lines grown directly onto the PLLA films:Human osteoblast Hob, a primary cell culture and Human osteosarcoma MG-63 cell line. This thesis gives also a comprehensive introduction to the area of Bone Tissue Engineering and provides a review of the work done in this field in the past until today, in that same field, including the one related with bone’s piezoelectricity. Then the experimental part deals with the effects of the crystallinity degrees and of the polarization in terms of surface properties and cellular bio assays. Three different degrees of crystallinity, and three different polarization conditions were prepared; which results in 9 different configurations under investigation.

O desenvolvimento de scaffolds baseados em biomateriais é uma estratégia promissora para a engenharia de tecidos e entrega de fármacos. Este trabalho centra-se na engenharia de tecido ósseo, o objectivo é desenvolver biomateriais electricamente modificados, com diferentes valores de cristalinidade e propriedades eléctricas, e estudar o seu impacto no comportamento biológico da célula de modo a prever o efeito desses materiais na regeneração do tecido. É já amplamente conhecido o fato de o osso possuir características piezoeléctricas, e reconhecido que estas contribuem para os mecanismos de regulação do crescimento e reparação do tecido ósseo. Além disso é um facto aceite que a estimulação eléctrica também influencia o crescimento e reparação do osso. Os materiais piezoeléctricos apresentam assim vantagens quanto à sua utilização em engenharia de tecido ósseo, e têm vindo a ser estudados para esse efeito. No presente trabalho foram desenvolvidos filmes de ácido poli-L-láctico (PLLA), um polímero sintético semi-cristalino que é biocompatível, biodegradável, e piezoeléctrico, que se apresenta como promotor da regeneração óssea. O PLLA é um material aceite para implantes em humanos pela “Food and Drug Administration” (FDA), e está já a ser utilizado em várias estratégias e produtos para uso clínico. O presente estudo consiste numa primeira fase de preparação e caracterização de filmes de PLLA em termos de propriedades estruturais e de superfície, e numa segunda fase de avaliação do comportamento celular em termos de viabilidade, proliferação, morfologia e mineralização, para cada uma das configurações de PLLA obtidas. Os filmes foram preparados pelo método de evaporação do solvente com molde, e submetidos a diferentes tratamentos térmicos de forma a obter diferentes valores de cristalinidade. Estas plataformas foram depois electricamente polarizadas, positiva e negativamente, por meio de descarga de corona para modular as suas propriedades eléctricas. Os ensaios celulares foram realizados utilizando duas linhas celulares osteoblásticas, em contacto direto com as superfícies de PLLA: Osteoblastos Humanos - Hob, cultura primária de células, e linha de Osteosarcoma Humano - MG-63. Este trabalho também inclui uma introdução teórica para área da Engenharia de Tecido Ósseo, e resume o trabalho de investigação realizado nesta área até hoje incluindo aquele relacionado com a piezoelectricidade do tecido ósseo. A parte experimental dedica-se aos efeitos do grau de cristalinidade e da polarização nas propriedades de superfície do material e nos ensaios biológicos. Foram estudadas nove configurações, originadas por três valores de cristalinidade: 0, 7 e 35%, e três tipos de polarização: positiva, negativa e neutra (apenas com o tratamento térmico análogo).