Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10773/14301
Title: HPLC-FL for determination of hormones in bivalves
Other Titles: Determinação de hormonas em bivalves por HPLC-FL
Author: Juaristi, Ane Iruretagoiena
Advisor: Duarte, Armando
Duarte, Regina Maria Brandão de Oliveira
Keywords: Química analítica
Cromatografia líquida de alta resolução
Fluorescência
Bivalves - Hormonas
Defense Date: 29-Jul-2014
Publisher: Universidade de Aveiro
Abstract: The main objective of this work was the application of an isocratic high performance liquid chromatography (HPLC) method coupled with a fluorescence detector to find the best conditions for the separation and quantification of 17β-estradiol (E2) and 17α-ethinyl estradiol (EE2) hormones in bivalve samples. A reversed phase column (Kromasil 100 C18, 5μm, 15 x 0.21cm), was employed with a fluorescence detector operating at excitation and emission wavelengths of 280nm and 305nm, respectively. A calibration curve was obtained with a good correlation coefficient for each compound. During the chromatographic analysis of the bivalve extracts, there were contamination problems, originated from glassware containers, E2 and EE2 standards preparation, and during hormones extraction from the samples. Thus, in a first step, a special attention was given to the elimination of these contamination problems in order to obtain the lowest limits of quantification for both E2 and EE2, and achieve their quantification in oyster samples. Therefore, after the washing process routinely applied in the laboratory, all glassware employed in samples preparation were washed with acetonitrile followed by the mobile phase used in the chromatographic analysis. After this washing procedure, and the use of a pre-column in the chromatographic separation process, the identification and quantification of hormone E2 was successfully accomplished for the oyster samples. An average value of 24.59 ng/g was obtained for oyster samples collected at an aquaculture location in Aveiro.
O principal objetivo deste trabalho foi a aplicação de um método de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC, sigla inglesa para High-Performance Liquid Chromatography) acoplada a um detetor de fluorescência para encontrar as condições mais adequadas para a separação isocrática das hormonas 17β-estradiol (E2) e 17-α-etinilestradiol (EE2), em amostras de bivalves. Foi utilizada uma coluna com uma fase reversa (Kromasil 100 C18, 5μm, 15 x 0,21 cm) e um detetor de fluorescência operando a comprimentos de onda de excitação e de emissão de 280nm e 305nm, respectivamente. Obtiveram-se curvas de calibração com bom coeficiente de correlação tendo-se contudo verificado problemas de contaminação durante as análises de amostras de bivalves. Estes problemas de contaminação tiveram origem, principalmente, no vasilhame de vidro usado, na preparação dos padrões e durante o procedimento de extração das hormonas E2 e EE2 das amostras. Assim, e numa primeira fase, procedeu-se à eliminação dos vários fatores potencialmente na origem dos problemas de contaminação de modo a ser possível obter os menores limites de quantificação possíveis para E2 e EE2, bem como proceder à respetiva quantificação nas amostras de bivalves. Assim, todo o material utilizado teve de ser cuidadosamente lavado com acetonitrilo e fase móvel utilizada na separação cromatográfica, posteriormente ao processo de lavagem habitualmente aplicado no laboratório. Depois deste processo de lavagem, e a utilização de uma pré-coluna no procedimento de separação cromatográfica, conseguiu-se identificar e quantificar a hormona E2 nos cromatogramas obtidos para as amostras de bivalves. Obteve-se um valor médio de 24.59 ng/g para as amostra de bivalves recolhidas num local de aquacultura em Aveiro.
Description: Mestrado em Química - Química Analítica e Qualidade
URI: http://hdl.handle.net/10773/14301
Appears in Collections:DQ - Dissertações de mestrado
UA - Dissertações de mestrado

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