DSpace
 
  Repositório Institucional da Universidade de Aveiro > Departamento de Biologia > BIO - Dissertações de mestrado >
 Análise quantitativa da proliferação celular no epitélio seminífero humano
Please use this identifier to cite or link to this item http://hdl.handle.net/10773/812

title: Análise quantitativa da proliferação celular no epitélio seminífero humano
authors: Graça, Maria Inês Pinho dos Santos
advisors: Sousa, Mário Manuel da Silva Leite de
Pereira, Maria de Lourdes Gomes
keywords: Biologia molecular
Espermatogénese
Hormonas sexuais
issue date: 2009
publisher: Universidade de Aveiro
abstract: Apesar de décadas de investigação básica na espermatogénese humana, pouco se sabe acerca da proliferação e diferenciação das células germinais humanas em termos quantitativos. Com este trabalho pretendeu-se estudar quantitativamente os efeitos temporais e específicos de cada estadio celular, da Hormona Foliculo Estimulante (FSH) e da testosterona (T) na capacidade proliferativa do epitélio seminífero humano normal sob condições de cultura de órgão. Para tal, fragmentos de túbulos seminíferos humanos foram mantidos em cultura durante 28 dias, usando-se a incorporação da 5- bromo-2’-deoxiuridina (BrdU) e a sua detecção por imunohistoquímica para aceder à proliferação celular. Os resultados quantitativos deste estudo mostraram uma perda gradual das células germinais meióticas e pós-meióticas ao longo do período de cultura, com uma boa manutenção da arquitectura geral dos túbulos e sem diminuição do número das células de Sertoli. Verificou-se que a taxa de proliferação das espermatogónias A dark era bastante baixa independentemente do suplemento hormonal. A proliferação das espermatogónias A, espermatogónias B e pré-leptótenos, foi máxima durante a primeira semana de cultura atingindo valores mais elevados quando induzida pelas hormonas (FSH e testosterona). Ao final da primeira semana houve diferenciação das espermatogónias e pré-leptótenos em espermatócitos em zigóteno e paquíteno e espermatócitos secundários, promovendo as hormonas uma aceleração da passagem de leptóteno para paquíteno em especial na concentração 50 U/L de FSH e 1μmol/L de testosterona. A FSH + T aumentou a sobrevida das células germinais, estimulou a proliferação das espermatogónias e a diferenciação das células germinais, durante a primeira semana de cultura. Com este estudo, foi possível quantificar pela primeira vez a proliferação e diferenciação das células germinais, utilizando uma metodologia bastante reprodutível e com resultados semelhantes aos in vivo. ABSTRACT: In spite of decades in study of human spermatogenesis almost anything is known about germinal cell proliferation and differentiation in quantitative ways. The aim of this project was to study quantitatively the temporal and stage specific effects of Follicle Stimulating Hormone and testosterone on the proliferative capacity of the normal human seminiferous epithelium under organ culture conditions. Seminiferous tubules fragments were kept in culture during 28 days, and 5-bromo-2’-deoxyuridine (BrdU) incorporation was used followe by immunohistochemistry detection to achieve cellular proliferation. Quantitative data of this study demonstrated a gradual loss of meiotic and pos-meiotic germinal cells during the culture period, no decrease on Sertoli cells number and a good maintenance of the seminiferous tubules general architecture. The rate of A dark spermatogonia proliferation was very low and was independently of hormonal supplement. Spermatogonia A, spermatogonia B and pre-leptotene spermatocytes proliferation was higher during the first week of culture, and reached its highest values in response to hormonal stimulation. At the end of the first week occurred differentiation of BrdU-labelled pre-leptotene spermatocytes into zygotene and pachytene spermatocytes and the presence of FSH and testosterone promoted an acceleration of leptotene spermatocyte into pachytene spermatocyte, especially when the 50 U/L of FSH and 1μmol/L of testosterone concentration were used. FSH + T increased germ cell survival, spermatogonial proliferation and germinal cell differentiation, during the first week of culture. In this study it was possible to quantify, for the first time germinal cell proliferation and differentiation, using a high reproducible methodology which gave results similar to in vivo conditions.
description: Mestrado em Biologia Molecular e Celular
URI: http://hdl.handle.net/10773/812
appears in collectionsBIO - Dissertações de mestrado
UA - Dissertações de mestrado

files in this item

file description sizeformat
2009000717.pdf14.04 MBAdobe PDFview/open
statistics

Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.

 

Valid XHTML 1.0! RCAAP OpenAIRE DeGóis
ria-repositorio@ua.pt - Copyright ©   Universidade de Aveiro - RIA Statistics - Powered by MIT's DSpace software, Version 1.6.2