DSpace
 
  Repositório Institucional da Universidade de Aveiro > Departamento de Química > DQ - Dissertações de mestrado >
 Proteomic analysis of mammary cells throughout differentiation
Please use this identifier to cite or link to this item http://hdl.handle.net/10773/7229

title: Proteomic analysis of mammary cells throughout differentiation
other titles: Análise protéomica de células mamárias em processo de diferenciação
authors: Ribeiro, Miguel Costa
advisors: Helguero, Luisa
Vitorino, Rui
keywords: Bioquímica
Proteómica
Glândulas mamárias
Diferenciação celular
Estrogénios
Apoptose
issue date: 2011
publisher: Universidade de Aveiro
abstract: A sinalização paracrina e autocrina desempenha um papel importante na proliferação, diferenciação e apoptose das células epiteliais mamárias. Apesar de este facto ser globalmente aceite os mecanismos pelos quais estes processos ocorrem ainda não são totalmente compreendidos. Em particular, a acção dos estrogénios através do receptor de estrogénio alpha (ERα) e beta (ERβ) afectam profundamente a proliferação e diferenciação; no entanto o papel do ERβ nestes processos é ainda pouco conhecido. Com o objectivo de melhor compreender os mecanismos de sinalização envolvidos na diferenciação das células epiteliais mamárias fez-se a recolha do meio condicionado (CM) de células HC11 nas 3 etapas de diferenciação: stem-cell like (SCL), predifferenciadas (PD) e funcionalmente diferenciadas (D). Em seguida, as proteínas do CM foram separadas com recurso a SDS-PAGE e 2D-PAGE e identificadas por MALDI-TOF/TOF. Os nossos resultados mostram que células em SCL segregam factores que possuem um papel pró-angiogenico/invasor e de sobrevivência, bem como outros factores que desempenham a função oposta. Estes resultados estão de acordo com o estado activo de proliferação e migração observado nestas células. Com o inicio da diferenciação (células em PD e D) ocorreu uma mudança nas proteínas mais secretadas, sendo possível observar um aumento do nível de proteínas que regulam a adesão e apoptose. Para estudar os mecanismos regulados pelo ERβ, o CM de células não diferenciadas, bem como de células a entrar em diferenciação (- EGF) e totalmente diferenciadas (D) foi recolhido após a activação do ERβ por ligandos. As proteínas presentes no CM foram novamente separadas por SDS-PAGE e 2D-PAGE e identificadas por MALDITOF/ TOF. Os nossos resultados mostraram uma diferença nos níveis de proteínas segregadas em SCL+EGF quando comparado com SCL-EGF, indicando que as vias metabóicas que mantêm as células numa condição indiferenciada como o EGF também comunicam com a sinalização activada por ERβ. Além disso, em concordância com SCL-EGF, as células em D, as proteínas reguladas pelo ERβ estavam relacionadas com adesão e apoptose indicando que o estado celular de diferenciação modula a sinalização do ERβ; sendo que o já identificado papel de supressor tumoral do ERβ é desencadeado apenas quando as células começam a diferenciar.

Paracrine and autocrine signalling play an important role in proliferation, differentiation and apoptosis of mammary epithelial cells. Despite this fact being accepted unanimously, the mechanisms by which these processes occur are not fully understood. In particular, estrogens acting through estrogen receptors alpha (ERα) and beta (ERβ) profoundly affect proliferation and differentiation; however, knowledge about ERβ role in these processes is still unclear. With the goal to best understand the signalling mechanisms involved in mammary epithelial cells differentiation, we collected the conditioned media (CM) of HC11 cells in the three stages of differentiation: stem-cell like (SCL), pre-differentiated (PD) and functionally differentiated (D). Next, the proteins in the CM were separated using SDS-PAGE and 2D-PAGE and identified by MALDI-TOF/TOF. Our results showed that SCL cells secrete factors with proangiogenic/ invasion and survival roles as well as factors with the opposite functions. These results were in agreement with the controlled active proliferation and migration observed in these cells. With the beginning of differentiation (PD and D cells) a change in the most secreted proteins occurred, being possible to observe a raise in the levels of proteins that regulate adhesion and apoptosis. To study the mechanisms regulated by ERβ, the CM of SCL cells either kept undifferentiated (+EGF), entering differentiation (-EGF) or fully differentiated (D) was collected following ERβ ligand activation. Proteins present in the CM were once again separated by SDS-PAGE and 2D-PAGE and identified by MALDITOF/ TOF. Our results showed a difference in the levels of proteins secreted in SCL+EGF compared to SCL-EGF, indicating that pathways that maintain the undifferentiated SCL stage such as EGF also cross talk with ERβ signalling. Moreover, similar to SCL-EGF, in D cells, proteins regulated by ERβ were cell adhesion and apoptosis related proteins indicating that the cellular state of differentiation modulates ERβ signalling; being that the previously identified tumour suppressor role of ERβ is triggered only with the beginning of differentiation.
description: Mestrado em Bioquímica
URI: http://hdl.handle.net/10773/7229
appears in collectionsDQ - Dissertações de mestrado
UA - Dissertações de mestrado

files in this item

file description sizeformat
5219.pdf2.43 MBAdobe PDFview/open
statistics

Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.

 

Valid XHTML 1.0! RCAAP OpenAIRE DeGóis
ria-repositorio@ua.pt - Copyright ©   Universidade de Aveiro - RIA Statistics - Powered by MIT's DSpace software, Version 1.6.2