Detecção de bactérias periodontais e análise de polimorfismos da IL1

Abstract

O presente estudo visa optimizar a metodologia de PCR em tempo real para a identificação de 5 bactérias que contribuem para a iniciação e/ou progressão de diversas formas de periodontite. Nos pacientes com periodontite foram ainda estudados os polimorfismos do gene IL-1, que têm vindo a ser relacionados com uma maior susceptibilidade de desenvolvimento da doença. Foram analisadas, por PCR em tempo real, amostras da placa bacteriana infragengival de indivíduos doentes (n=14) e indivíduos saudáveis (n=6), no sentido de identificar diferenças respeitantes à presença de Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Treponema denticola e Prevotella intermedia. Todas as bactérias analisadas foram identificadas por PCR em tempo real, que mostrou ser uma técnica mais sensível e económica quando comparada com um kit de Hibridização comercial (Micro-Ident). Observou-se uma elevada prevalência dos microrganismos periodontais em todos os pacientes, não tendo sido detectada a bactéria A. actinomycetemcomitans em cerca de 50% dos casos analisados. Nos indivíduos saudáveis foram detectados T. forsythia, T. denticola e P. intermedia, mas nunca P. gingivalis. Alguns destes indivíduos apresentavam níveis detectáveis de A. Actinomycetemcomitans. Nos pacientes com periodontite foram também analisados os polimorfismos IL-1A(C-889T) e IL-1B(C+3953T), pela metodologia de PCR-RFLP,verificando- -se que cerca de 50% dos indivíduos estudados eram homozigóticos para o alelo 1 do polimorfismo IL-1B(C+3953T). Os restantes 50% possuíam o alelo 2 (associado à periodontite agressiva), 21% dos quais em homozigotia. No caso do polimorfismo IL-1A(C-889T), 42,9% dos pacientes eram homozigóticos para o alelo 1 e os restantes possuíam o alelo 2 (14,3% em homozigotia). O PCR em tempo real mostrou ser uma técnica de elevada sensibilidade que permite a rápida identificação dos microrganismos associados à doença periodontal. A população estudada apresenta diferenças relativamente aos polimorfismos IL-1A(C-889T) e IL-1B(C+3953T).

ABSTRACT: The aim of this study was to develop a real-time polymerase chain reaction (PCR) methodology for the detection of 5 bacterial species that have been correlated with several periodontitis forms. We also intended to study the IL-1 gene polymorphisms in patients with confirmed periodontitis, since some studies suggest that host genes are important for disease susceptibility. The presence of Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Treponema denticola and Prevotella intermedia was analyzed by real-time PCR in order to identify differences between subgingival plaque samples of patients with periodontitis and healthy individuals. 14 patients with periodontitis and 6 healthy individuals were included in the study. All bacterial species were identified by real-time PCR, which was shown to be a more sensitive and less expensive technique, when compared with a commercial hybridization kit (Micro-Ident). A high prevalence of the periodontal microorganisms was found in all patients studied; however A. actinomycetemcomitans was not present in about 50% of these patients. In healthy individuals, T. forsythia, T. denticola and P. intermedia were detected, but P. gingivalis was not found. Some of these individuals showed detectable levels of. A. Actinomycetemcomitans. Gene polymorphisms IL-1A(C-889T) and IL-1B(C+3953T) were analyzed in all the patients diagnosed with periodontitis, by the PCR-RFLP methodology. About 50% of the individuals were homozygous for allele 1 of the polymorphism IL-1B(C+3953T), while the remaining 50% presented allele 2 (21% being homozygous), which has been correlated with severe periodontitis. For IL-1A(C-889T) polymorphism, about 42,9% of the individuals were homozygous for allele 1, while the remaining presented allele 2 (14,3% being homozygous) Real-time PCR was found to be a highly sensitivity technique allowing the rapid identification of periodontal microorganisms. In the present work we found significant differences regarding gene polymorphisms IL-1A(C-889T) and IL-1B(C+3953T), in the studied population.