A presença de eosinofilia reativa após transplantação hepática pediátrica e a sua relevância nos processos de disfunção do enxerto

Abstract

Nas últimas décadas, vários estudos têm mostrado que um elevado número de eosinófilos no sangue periférico (> 500 células/μL ou 10% do total de leucócitos) pode ser um sinal de rejeição celular aguda, particularmente no primeiro mês após transplantação. Especialmente em crianças, a aquisição de eosinofilia persistente e de diferentes patologias de cariz alérgico, pode estar associado com a disfunção crónica do enxerto hepático. Contudo, a etiologia desta eosinofilia periférica reativa e a sua influência no processo de disfunção do enxerto hepático permanecem pouco claras. Neste trabalho, avaliou-se se a presença de eosinofilia induzia alterações fenotípicas e funcionais nos basófilos; nas subpopulações de monócitos (clássicos, intermédios, não-clássicos e uma população de monócitos clássicos que expressa o recetor de alta-afinidade da IgE); nas células dendríticas plasmacitóides (pDC) e mieloides (mDC); nas subpopulações de células B (imaturas/transicionais, naïve, células memória ou plasmoblastos IgA+, IgG ou IgM+); nas células T (Th7c1, Th/c17, Th9, Th produtoras de IL-6 e T-γδ) e nas células NK (CD56bright e CD56dim) do sangue periférico. Estudaram-se 35 crianças (16 do sexo feminino e 19 do sexo masculino) sem eosinofilia (TRH S/ Eosinofilia) e 17 crianças (8 do sexo feminino e 9 do sexo masculino) com eosinofilia (TRH C/ Eosinofilia), cujas médias de idades eram 9,9 ± 5,6 e 8,2 ± 4,7, respetivamente. A expressão dos recetores CD123, CD33, CD15, CD16, CD14, HLA-DR e IgE ligada ao seu receptor de alta afinidade, nos monócitos, neutrófilos, basófilos, eosinófilos e células dendríticas do sangue periférico, bem como a caracterização das diferentes populações de células B, foi efetuada por citometria de fluxo. A quantificação das subpopulações funcionais de células T, nomeadamente, Th/c17, Th/c1, Th9 e células T IL-6+, foi efetuada por citometria de fluxo, após ativação, in vitro, com PMA e ionomicina. No grupo com eosinofilia, foi observado um aumento estatisticamente significativo na expressão de CD123 em eosinófilos; da IgE ligada ao seu recetor de alta-afinidade em basófilos, pDC, mDC e na subpopulação de monócitos clássicos IgE+; da expressão de CD16 em neutrófilos e da expressão de HLA-DR na subpopulação de monócitos clássicos CD15+. Relativamente às populações de células B, verificou-se um aumento da frequência de plasmoblastos, e destes dos que expressavam IgA e de células memória CD27+/IgA+. Nas diferentes subpopulações de células T não foram observadas diferenças estatisticamente significativas. No entanto, observou-se uma tendência forte para um aumento da percentagem de células Th17 no grupo de doentes com eosinofilia. Assim, os nossos resultados apontam para uma eosinofilia reativa mediada por IgE, que parece estar a induzir uma ativação dos eosinófilos, neutrófilos e subpopulação de monócitos clássicos. Como esperado, detetaram-se alterações nos compartimentos de células B, parecendo ocorrer um aumento destas células a expressar IgA e uma tendência para um aumento das células Th17 no grupo TRH C/Eosinofilia.

In recent decades, several studies have reported that a higher eosinophil count (>500 cells/μL or 10% of total of leucocytes) can be a sign of acute cellular rejection, particularly in the first month after liver transplantation. Specifically in children, the acquisition of persistent eosinophilia and different pathologies of allergic nature, might be associated with chronic liver graft dysfunction. However, the etiology of peripheral reactive eosinophilia, after pediatric liver transplantation, and their consequences on the liver graft dysfunction remain unclear. In this work we evaluated if the presence of eosinophilia induced phenotypic and functional alterations on peripheral blood basophils; monocyte subpopulations (classical, intermediate, non-classical and high affinity IgE receptor+ classical ,monocytes); plasmacytoid (pDC) and myeloid dendritic cells (mDC); B cell subpopulations (immature/transitional , naïve, IgA+, IgG+ or IgM+ memory (CD27+ and CD27-) or plasmoblasts, T cells (Th/c1; Th/c 17; Th9; Th producing IL-6 and T-γδ) and NK cells (CD56bright and CD56dim). With that purpose we studied 35 children (16 females and 19 males) without peripheral eosinophilia (TRH S/ Eosinophilia) and 17 children (8 females and 9 males) with eosinophilia (TRH C/Eosinophilia) at time of blood collection, whose average age were 9.9 ± 5.6 and 8.2 ± 4.7 respectively. The expression of CD123, CD33, CD15, CD16, CD14, HLA-DR and IgE bounded to its high-affinity receptor on peripheral blood monocytes, basophils, neutrophils, eosinophils and dendritic cells, as well as, the characterization of the different B cell compartments, was performed by flow cytometry. The quantification of the functional T cell subpopulations, namely Th/c17, Th/c1, Th9 and IL-6+ T cells were also done by flow cytometry, after in vitro activation with PMA/ionomycin. We observed, in the eosinophilia group, a statistical significant increase on the expression of CD123 on eosinophils; IgE bounded to its receptor on basophils, pDC, and mDC and on a small subpopulation IgE+ on classical monocytes, on the expression of CD16 on neutrophils and on the expression of HLA-DR on CD15+ classical monocyte subpopulation. Concerning B Cells populations, a significant increase in the total plasmablasts, plasmablasts that express IgA and CD27+ memory cells that express IgA was found in the eosinophilia group. No statistical differences were observed among the different T cell subsets. However, we observed a strong tendency for a higher frequency of Th17 cells, in the eosinophilia group. Our results point to an IgE-mediating eosinophilia, since a significant increase of IgE bounded to its receptor was observed in all leucocytes that express FcεRI, which, somehow, seem to induce a higher degree of activation on eosinophils, neutrophils and classical monocytes subpopulations. As expected, some changes were detected in B cell compartments, particularly an increase of B cells expressing IgA and a tendency to an increase of Th17 cells in TRH C/Eosinophilia group.