Production of hyperimmune egg samples followed by aqueous biphasic systems fractionation

Abstract

Antibodies are glycoproteins that belong to the family of immunoglobulins (Ig). They are found in plasma and extracellular fluids of vertebrates and are produced by B cells to identify and to neutralize pathogens and foreign molecules (antigens) in our body. The production of monoclonal and polyclonal antibodies and their ability to bind to a specific antigen, allows their use in quantitative and/or qualitative analyses of specific antigens, in purification methods and in modulating physiological effects in research, diagnosis or therapy. Hen antibodies (IgY) have been studied for such type of applications because they can be produced at a lower cost and in larger amounts. The production of IgY for use in passive immunization has been suggested because there are many antibioticresistant microorganisms, diseases that do not respond to the applied drugs and individuals who are unable to respond to vaccination. The major objective of this work consists on the injection of hens with specific antigens (produced with the aid of fusion tags) which leads to a humoral immune response and to the production of hyperimmune eggs, which were followed a long time. Finally, the stability of IgY was evaluated in aqueous solutions of salts and polymers that could be used in the creation of aqueous biphasic systems for purification purposes.

Os anticorpos pertencem à família das Imunoglobulinas (Ig), e que se encontram no plasma e no fluído extracelular dos vertebrados, sendo produzidos pelas células B de modo a identificar e neutralizar as moléculas estranhas e patogénicas (antigénios) ao nosso organismo. A produção de anticorpos monoclonais e policlonais e a sua capacidade para se ligarem a antigénios específicos possibilitou a sua aplicação em análises quantitativas e/ou qualitativas, em métodos de purificação de antigénios e na modulação de efeitos fisiológicos em investigação, de diagnóstico ou terapêutica. Os anticorpos das aves (IgY) têm sido muito estudados neste tipo de aplicações por serem uma fonte mais económica e existirem em maior quantidade. A produção de IgY para aplicação em imunização passiva tem vindo a ser estudada nos últimos anos, e isto deve-se ao fato de existirem muitos microrganismos resistentes a antibióticos, doenças que não reagem aos fármacos aplicados e de indivíduos que são incapazes de responder ao método de vacinação tradicional. Para a produção de anticorpos específicos, expõem-se a ave a um determinado antigénio, através de injeção, levando posteriormente a uma resposta imunitária humoral e assim à produção de ovos hiperimunes. O grande objetivo deste trabalho consistiu na produção de ovos hiperimunes, na qual se acompanhou o perfil dos mesmos ao longo do tempo, seguido da avaliação da estabilidade de IgY em soluções aquosas de sais e polímeros utilizados em sistemas aquosos bifásicos que poderão ser estratégias promissoras para a sua purificação.