Please use this identifier to cite or link to this item: http://hdl.handle.net/10773/14639
Title: Transcriptomic analysis of Anopheles Stephensi salivary glands during the infection with Plasmodium Berghei
Other Titles: Análise transcriptómica de glândulas salivares de Anopheles Stephensi durante a infeção por Plasmodium Berghei
Author: Couto, Joana Manuel Gonçalves Teixeira
Advisor: Domingos, Ana Isabel Amaro Gonçalves
Pereira, Maria de Lourdes Gomes
Keywords: Biologia molecular
Malária
Glândulas salivares
Defense Date: 3-Aug-2015
Publisher: Universidade de Aveiro
Abstract: Malaria remains the leading cause of morbidity and mortality in tropical and subtropical regions, contributing to the emergence of 198 million clinical cases in 2013. The mosquito Anopheles stephensi is one of the most prevalent malaria vectors in the Asian region having recently been implicated in malaria resurgence in Djibouti. Using techniques as RNA sequencing, differentially expressed genes in the salivary glands of the mosquito in response to infection by Plasmodium berghei were identified. Some of these genes can be selected to evaluate their potential as targets for malaria transmission blocking. Among the genes with differentially expression resulting from the analysis of RNA-seq results and confirmation by qPCR, a gene related transport of Cl- and HCO3 2-, prestin, was upregulated after infection with P. berghei. This gene plays a crucial role in parasite invasion in the midgut and the optimization of the environment in which the parasite develops. For this reason, the silencing of this transcript was made to evaluate the function of prestin in salivary glands. The gene silencing, using RNA interference technique, allow inferring about the role or function of prestin gene in a particular metabolic or physiological process. After prestin gene silencing, the number of viable mosquitoes had a significant decrease in comparison with the control (β2M). There was also a significant decrease in the number of mosquitoes before injection and at the last day after injection. The number of sporozoites were not generally affected by silencing of prestin when compared with the control. To clarify other results obtained during the study, as the influence of the silencing of prestin in the survival of mosquitoes and the presence and number of sporozoites in the salivary glands, will be essential to perform qPCR to determine differential expression of this gene after silencing. Furthermore, it is also important to examine differential expression of off-target (ASTE006714) after silencing prestin, since the sequence of this gene have a high percentage of identity with prestin.
A malária continua a ser a principal causa de morbilidade e mortalidade nas regiões tropicais e subtropicais, contribuindo para o surgimento de 198 milhões de casos clínicos no ano de 2013. O mosquito Anopheles stephensi é um dos vectores de malária mais prevalentes na região asiática, tendo sido recentemente implicado no ressurgimento de malária em Djibouti. Através de técnicas como sequenciação de RNA, genes diferenciadamente expressos nas glândulas salivares deste mosquito em resposta à infecção por Plasmodium berghei foram identificados. Alguns destes genes podem ser selecionados para avaliar a sua potencialidade como alvos para bloqueio da transmissão da malária. Entre os genes com expressão diferencial resultante da análise dos resultados de RNA-seq e confirmação por qPCR, um gene relacionado com o transporte de Cl- e HCO3 2-, prestin, estava sobrexpresso após infeção com P. berghei. Este gene tem um papel crucial na invasão do parasita no intestino médio e na optimização do meio em que o parasita se desenvolve. Por esse motivo, o silenciamento deste transcrito foi efectuado para averiguar o papel funcional nas glândulas salivares. O silenciamento de genes utilizando a técnica de RNA de interferência permite inferir sobre o seu papel ou função num dado processo metabólico ou fisiológico. Após o silenciamento do gene prestin, o número de mosquitos viáveis apresentou um decréscimo significativo em comparação com o controlo (β2M). Também houve uma queda significativa entre o número de mosquitos antes da injeção e no último dia após injecção. O número de esporozoítos em geral não foi afectado pelo silenciamento da prestin quando comparado com o controlo. Para esclarecer resultados obtidos durante o estudo, tais como a influência do silenciamento da prestin na sobrevivência dos mosquitos e a presença e número de esporozoítos na glândulas salivares, seria fundamental realizar ensaios de qPCR para determinar a expressão diferencial deste gene após silenciamento. Além disso, será também importante analisar a expressão diferencial do off-target (ASTE006714) após silenciamento da prestin, uma vez que a semelhança da sequência entre este e a prestin é elevada.
Description: Mestrado em Biologia Molecular e Celular
URI: http://hdl.handle.net/10773/14639
Appears in Collections:UA - Dissertações de mestrado
DBio - Dissertações de mestrado

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