Métodos alternativos de deteção de Salmonella e Listeria monocytogenes

Abstract

Atualmente vivemos numa sociedade moderna que exige qualidade nos produtos que consome. A maioria dos produtos que consumimos já não é proveniente de produção pessoal mas sim de um grande circuito de produção e distribuição promovido pela globalização. O fácil acesso a uma grande variedade de produtos dificulta o controlo de salubridade destes, uma vez que os efeitos das falhas de salubridade atingem muitas pessoas de diferentes países e até de diferentes continentes. A qualidade microbiológica dos alimentos tornou-se portanto um fator bastante importante para os operadores do setor alimentar, bem como para as autoridades competentes. A deteção atempada de microrganismos patogénicos torna-se fundamental, pois é uma forma de evitar infeções alimentares. De entre as infeções mais importantes reportadas nos últimos anos encontram-se a salmonelose (provocadas por bactérias do género Salmonella), e a listeriose (provocadas por Listeria monocytogenes). Os métodos tradicionais (ISO 6579:2002 e ISO 11290-1:1996, respectivamente) para pesquisa de Salmonella spp. e Listeria monocytogenes requerem cerca de uma semana de análise, pelo que muitas vezes é necessário recorrer a métodos mais céleres e menos dispendiosos. A espectroscopia de infravermelho (MIR) tem sido usada desde a década de 1980 como um método complementar para diferenciação de bactérias, pois o espectro de absorvância no infravermelho representa um “fingerprint” que é característico de uma substância química ou biológica. Esta técnica apresenta diversas vantagens no campo da classificação e identificação microbiológica: é um método muito rápido (praticamente não exige manipulação da amostra e permite obter espectros em apenas alguns segundos), não destrutivo, pode ser estudada qualquer amostra em qualquer estado, pode ser usado com diferentes finalidades (como por exemplo, deteção, enumeração, classificação e identificação) e permite a diferenciação de níveis taxonómicos (serotipo, estirpe, espécie ou género). Neste trabalho foi avaliado o potencial de espectroscopia de infravermelho (MIR), na confirmação de Salmonella spp. e Listeria monocytogenes em produtos alimentares. Desta forma, foram utilizados isolados de Salmonella e Listeria (identificados pelo sistema API) provenientes de alimentos (e.g. queijos, enchidos e pratos confecionados). De seguida analisaram-se diretamente por MIR as colónias provenientes do meio OCLA (Listeria) e do meio XLD (Salmonella). No caso da Salmonella o API não permite distinguir as diferentes espécies. A análise multivariada de espectros permitiu diferenciar as espécies de Listeria bem como a Salmonella das restantes Enterobacteriaceae (e.g. Proteus spp., Shigella spp, e Citrobacter spp). Com este estudo concluiu-se que a técnica de MIR permite uma confirmação rápida dos dois microorganismos patogénicos, Salmonella e Listeria, e permite distinguir diferentes espécies de Listeria e de Enterobacteriaceae.

Today we live in a modern society that demands for higher quality foods. Most of the products we consume are not from personal production, but from a great circuit of production and distribution promoted by globalization. The easy access to a variety of products difficult their control and the microbiological quality of food has become a very important factor for food industries as well as to the competent authorities. Early detection of pathogenic microorganisms becomes crucial in order to prevent foodborne diseases. Salmonella spp. and Listeria monocytogenes are important foodborne pathogenic microorganisms. The detection methods of both microorganisms (ISO 6579:2002 and ISO 11290- 1:1996, respectively) are quite lengthy, taking about 8 days to obtain results. Consequently, it is extremely important to validate faster methods with lower costs for laboratories. Vibrational spectroscopic techniques, infrared spectroscopy (IR) and Raman spectroscopy, have been used since the 1980s as complementary methods for bacterial differentiation owing to their rapid “fingerprinting” capabilities and the molecular information that they can provide. These techniques present several advantages in the microbiological classification and identification fields: they are fast (requiring virtually no sample processing), non-destructive, multi-purpose (e.g., detection, enumeration, classification, identification), discriminating at different taxonomic levels (serotype, strain, species or genus). In this study it was evaluated the potential of mid infrared spectroscopy (MIR), to confirm the presence of Salmonella spp. and Listeria monocytogenes in food. For this, we isolated Salmonella and Listeria (identified by API system) from food products (cheeses, sausages and prepared dishes). Then, colonies from OCLA medium (Listeria) and from XLD medium (Salmonella) were analysed directly with MIR. In the case of Salmonella, the API does not allow to discriminate the different species. The multivariate analysis of the spectra allowed the distinction of the different Listeria species and the differentiation of Salmonella from the other Enterobacteriaceae (e.g. Proteus spp., Shigella spp., Citrobacter spp.). We conclude that MIR allows the rapid confirmation of two important food pathogens, Salmonella and Listeria, and even permits to differentiate different species of Listeria and Enterobacteriaceae.