Aplicação de testes fenotípicos para deteção de AmpC

Abstract

A seletividade, eficácia e espetro de ação dos antibióticos β-lactâmicos faz deles a classe de antimicrobianos mais comummente prescritos para o tratamento de infeções causadas por enterobactérias. As β-lactamases surgem como um dos principais mecanismos de resistência microbiano aos antibióticos β-lactâmicos, onde as β-lactamases do tipo AmpC se assumem como clinicamente relevantes, ao conferir resistência à maioria das penicilinas, cefalosporinas e combinações de β-lactâmico/inibidor de β-lactamase. A dificuldade na deteção deste mecanismo de resistência antimicrobiana, associada a múltiplos genes de resistência de rápida evolução e transmissão bem como a inexistência, até à data, de guidelines de referência para a deteção de AmpC constitui um desafio no diagnóstico para o laboratório de microbiologia, que carece de uma estratégia definida para a pesquisa destas enzimas, a ser implementada na rotina hospitalar. São vários os métodos propostos para a deteção destas enzimas, quer genotípicos, quer fenotípicos. No último grupo podem destacar-se os que detetam a atividade AmpC em extratos enzimáticos e os que avaliam o efeito induzido pelos inibidores de AmpC sobre as enzimas. No presente trabalho foram usados discos de cefoxitina, cujo resultado foi comparado com um kit da casa comercial MAST, para a pesquisa e deteção de AmpC em 50 isolados bacterianos. O uso de discos de cefoxitina (30μg) para o screening destas enzimas mostrou-se sensível e específico. O teste fenotípico confirmatório da MAST revelou-se uma ferramenta útil na confirmação da presença destas enzimas. No contexto deste estudo, ambos os testes foram validados para introdução na rotina hospitalar.

The selectivity, efficacy and spectrum of action of β-lactam antibiotics make them the class of antibiotics most commonly prescribed to treat infections caused by Enterobacteriaceae. The β-lactamases emerged as one of the major mechanisms of microbial resistance to β-lactam antibiotics, where the AmpC β-lactamases themselves are clinically relevant, conferring resistance to most penicillins, cephalosporins and combinations of β-lactam/β-lactamase inhibitor. Detecting this mechanism of antimicrobial resistance can be difficult because it is associated with multiple resistance genes. Moreover, the lack of guidelines for detection of AmpC is a challenge in a microbiology laboratory. Therefore a strategy to detect this type of enzymes is needed, to be implemented in the daily routine. There are several methods proposed for the detection of the enzyme, either genotypic or phenotypic. In the latter group can be underlined those that detect the activity of AmpC in enzyme extracts and those who evaluate the effect induced by inhibitors on AmpC enzymes. In the present study, the results obtained with cefoxitin disks were compared to a commercial kit (MAST), for screening and detection of AmpC β-lactamases, in 50 bacterial isolates. The use of cefoxitin discs (30μg) for the screening test was sensitive and specific. The confirmatory test of MAST has proved to be a useful tool in confirming the presence of these enzymes. In the context of this research, both tests have been validated to be performed in the hospital daily routine.