Análise da histona H2A tipo 2-C na diferenciação celular e no cancro da mama

Abstract

A glândula mamária é um órgão secretor complexo cujo desenvolvimento morfológico e funcional produz-se logo ao nascimento e em estádios bem definidos, a saber: a puberdade, a gravidez e lactação. O presente estudo teve como objetivo analisar a expressão de histona H2A tipo 2-C nas células epiteliais de rato doméstico HC11 durante o processo de diferenciação, e nas células do cancro de mama humano MDAMB- 231. O nível de expressão de histona H2A tipo 2-C estudouse com as técnicas de Western Blot e imunohistoquímica. Com este fim, primeiro, procedeu-se à validação do anticorpo utilizando histona H2A tipo 2-C recombinante. Logo, analisarem-se células HC11 em fase de proliferação / pouco diferenciadas (SC-L), prédiferenciadas (PD) e funcionalmente diferenciadas (DIF), bem como das células do cancro da mama MDA-MB-231 pouco diferenciadas e tecido mamário de rato doméstico. Foi observado a expressão de histona H2A tipo 2-C apenas no estádio SC-L em células HC11, e em células do tecido mamário do rato doméstico apenas no estádio de prenhez caracterizado por alta proliferação. Histona H2A tipo 2C também foi detetada em células de cancro MDA-MB-231. Os estádios caracterizados pelo expressão de histona estão associados a ativação das vias MEK ½ / ERK ½ MAPkinase e PI3K / AKT pelo recetor de fator de crescimento epidérmico. A via p38-MAPcinase também e alvo de ativação nestas células. Procedeu-se ao uso de inibidores destas vias: UO126 (inibidor MEK ½), LY294002 (inibidor PI3K) e SB203580 (inibidor p38) para avaliar o efeito das mesmas sobre a expressão de histona H2A tipo 2-C. A expressão de histona resultou ser dependente do funcionamento das três vias. Os resultados indicam que a histona H2A tipo 2-C é ativada pelas vias MEK ½ / ERK ½, PI3K/AKT e p38-MAPcinase em células pouco diferenciadas em ativa proliferação e apontam à análise expressão da mesma como futuro alvo de estudos para identificar marcadores de progressão no cancro da mama.

The mammary gland is a complex secretory organ whose functional and morphological development takes place after birth and at well-defined stages, namely: puberty, pregnancy and lactation. The present study aimed to analyze the expression of histone H2A type 2-C in mouse mammary epithelial cells during the differentiation process, and in human breast cancer MDAMB- 231 cells. The level of expression of histone H2A type 2-C was studied with the techniques of Western blot and immunohistochemistry. To this end, first, we proceeded to validate the antibody using recombinant histone H2A type 2-C. Next, we examined HC11 cells in stages of proliferation/poor differentiation (SC-L), pre-differentiation (PD) and functional differentiation (DIF); the breast cancer cells MDA-MB-231 and mouse mammary tissue were also analyzed. We observed the expression of histone H2A type 2-C only in HC11 cells in stage SC-L, and in cells of mammary tissue only at pregnancy, which is characterized by high epithelial proliferation. Histone H2A type 2- C was also detected in MDA-MB-231cancer cells. The stages were the histone was detected are characterized by activation MEK ½ / ERK ½ MAP kinase and PI3K / AKT pathways by epidermal growth factor receptor. The p38-MAP kinase pathway is also a target in these cells. Therefore, we used inhibitors of these pathways: UO126 (MEK inhibitor ½), LY294002 (PI3K inhibitor) and SB203580 (p38 inhibitor) to evaluate the effect on the expression of histone H2A type 2-C. The expression of the histone resulted to be dependent on the action of the three ways. The results indicate that histone H2A type 2-C is activated by MEK½ / ERK ½, PI3K/AKT and p38-MAP kinase pathways in undifferentiated cells undergoing active proliferation. Therefore, studies on the expression of histone H2A type 2-C should be continued with the aim to identify progression markers in breast cancer.